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Q808对GABA代谢酶作用的研究 GABA简介 γ-氨基丁酸是哺乳动物中枢神经系统中主要的抑制性神经递质，约50%的中枢突触部位以其作为递质。 主要通过与其三种特意性受体结合发挥重要的生理活性。 GABA 主要分布于脑内，外周神经和其他组织中很少。GABA 在脑内含量很高，约为单胺类递质的 1000 倍以上。 GABA 在神经未梢的脑浆中合成后，由囊泡膜的 GABA 转运体输入囊泡。 GABA在作用于突触后膜的受体后，迅速被突触前、后神经元和突触间隙周围的胶质细胞摄取，终止其作用。 GABA GABAC:Cl通道 GABAb K通道 G蛋白 Ca通道 激活 抑制 GABA传递 GABAa:电压门控Cl通道 拟GABA作用（直接开放Cl通道） 代谢酶：GABA转氨酶、琥珀酸半醛脱氢酶 与GABA结构同源 与α2δ受体（电压依赖性Ca通道）结合 抑制Ca通道 抑制Na通道 作用于突出囊泡蛋白 谷氨酸 GAD 抗癫痫药的机制 GABA 受体分为 GABAA、GABAB 和 GABAC 三种型。 GABAA 受体和 GABAC受体都是由 GABA 门控的氯离子通道。 GABAB受体是与 G 蛋白偶联的受体，激活后通过胞内信号转导系统调制离子通道的活动。 中枢神经系统 GABA 受体的药理学分型 GABAA受体-Cl-通道复合物模型图 产生IPSP，抑制突触后神经元兴奋性。 GABA 代谢酶 脑内生成 GABA 的代谢通路称为 GABA 支路(GABA shunt)。 第一步反应α- 酮戊二酸经转氨基反应生成谷氨酸； 随后经谷氨酸脱羧酶(GAD)催化生成 GABA； GABA 通过 GABA 转氨酶(GABA-T)催化生成琥珀酸半醛(SSA) ； 活力极强的琥珀酸半醛脱氢酶(SSADH)的催化，使琥珀酸半醛快速氧化成琥珀酸，这样又回到了三羧酸循环。 GABA shun GABA-T GABA-T 在组织中分布广泛，因此 能迅速地由中枢和外周组织代谢，需磷酸吡哆醛(PLP)作为辅酶。PLP与 GADA-T 结合要更加紧密一些。最适PH8.2。 GABA 大多是在神经元外的细胞间或突触后的神经元中进行代谢的。 SSAD 对底物有高度特异性，此酶专一地催化琥珀酸半醛脱氢氧化成琥珀酸，其辅酶是NAD+。最适PH9.2。 SSADH 的高活性，使得即使在 GABA 代谢活跃的脑组织中也很难检测出琥珀酸半醛这个中间代谢物。 GABA-T 抑制剂 通过血脑屏障并选择性抑制GABA-T是一种设计癫痫药的有效方法。 GABA-T 抑制剂主要是 GABA 类似物，也包括少量的特殊结构的化合物： 1) Vigabatrin 类似物 2) 取代氨基戊酸类似物 3) 取代氨基丁烯酸类似物 4) 其它类型抑制剂:肼衍生物是很多辅酶为PLP的酶的抑制剂。 Q808对 GABA-T 和 SSADH 的抑制作用 材料与仪器 实验方法 材料与仪器 药品与试剂 对羟基苯甲醛(Sigma)，GABA(Fluka)，琥珀酸半醛(Fluka)，α-酮戊二酸(上海三爱思试剂有限公司)，NAD+(Sigma公司)，甘露醇(上海三爱思试剂有限公司)，蔗糖(上海三爱思试剂有限公司)，HEPES(Amresco)，EGTA(Amresco)，牛血清蛋白(Amresco)，焦磷酸钠(天津科密欧化学试剂开发中心)，EDTA(天津科密欧化学试剂开发中心)，磷酸钾(天津科密欧化学试剂开发中心)。其余为国产分析纯或化学纯试剂。 仪器 荧光分光光度计：FL-4500，Hitachi，Japan； 冷冻离心机：Z323K，Hermle，Germany； 电子恒温水浴锅：HHS-2S，光地仪器设备有 限 公司，上海； 电子天平：BS300S，赛多利斯天平有限公司，北京； 超低温冰箱：U410，New Brunswick Scientific Co., Inc.，USA 实验方法 GABA-T 制备 按照简化的Churchich的方法[159]从成年雄性Sprague-Dawley大鼠分离GABA-T。除了特别说明，纯化步骤在4°C进行并且所有缓冲液都含有0.1 mmo/L EDTA和1 mmol/L β-巯基乙醇。大鼠用乙醚深度麻醉后取脑。以含1 mmol/L α-酮戊二酸的10 mmol/L磷酸钾(pH 7.4)缓冲液制备脑匀浆(每个大脑约4 mL匀浆)。在该匀浆中慢慢加入1 mo