组织固定处理与包埋常见问题与对策.ppt

组织固定处理及包埋常见问题与对策 马恒辉 周晓军 南京军区南京总医院 病理科 本文就组织固定处理及包埋常见的问题与对策，进行分析与讨论，旨在与技术人员一起学习交流，以提高组织固定处理及包埋的质量，为组织切片和染色以及病理诊断提供有力的保证。 1固定 组织固定的目的在于保存组织。 组织离体后要尽快用固定液浸泡，达到渗透组织的目的，并使组织具有一定的硬度。 这样不仅可以防止组织的自溶改变，而且，还可以防止组织中的有效成分，在其后的一系列处理改变性状。 所以，固定标本尤其是大块或条索状标本时，要尽可能的保持生活时的状态，不得扭曲标本。 目前，10%中性缓冲福尔马林是大家普遍公认的应用范围最广的常用固定液之一。 它对大多数病理标本的具有良好的固定作用，穿透速度快，组织硬化小。 既能作为短时间固定标本的需要，又能满足长时间保存标本的需要。 组织在10%中性缓冲福尔马林中，可以保存数月而不会发生不良变化，且细胞核和细胞浆的微细部分均保存良好，对大多数免疫组化反应也是适用的。 图1：结肠组织呈现保存完好的结构 该切片取之于外科手术病人标本，标本离体后立即投入固定液。 固定液首先接触上皮部分，有效地保存了上皮及绒毛结构，并快速有效地阻止了细胞的自溶和腐败。 图2：腺体结构欠完整 该组织切片取之动物实验的消化道肠黏膜，自溶引起上皮与基底部分脱落和分离， 切片中的这些改变可能是由于肠道细菌成分腐败所致。 图3：肺组织切片，组织结构不良 如果组织固定不好，处理不良，染色也会受到影响。 所以，及时的固定，及充足的固定时间是保证组织处理质量优良的基本要素。 图4：肺组织固定良好，组织结构完整 图5：肠黏膜组织没有固定好 细胞成分未被有效保存，染色差，特别是腺体部分的细胞核与细胞浆缺乏明显对比，一片深染。 目前，不少科室在使用自动化仪器设备时，因为程序设置不当，标本没有足够的时间在固定液停留，有的甚至用乙醇脱水直接替代了固定步骤。 切记，组织必须在固定液停留足够的时间，才能获得良好的固定效果。 在戊二醛、Helly、Zenker、Bouin中固定的组织，必须及时取出冲洗，保留在适当的液体中。 如果放置时间过长，可能会导致固定过度，甚至影响染色。 图6：肠黏膜组织固定良好 腺体结构完整，细胞清晰，细胞核与细胞浆染色对比鲜艳。 2组织处理 组织处理包括三个主要步骤：脱水、透明和浸透； 目的在于从组织标本中移去多余的水分，引入一种遇热融化遇冷凝结的介质（比如石蜡），以利于组织切片。 组织处理的方式通常有二种。 一种是开放式，即标本从一个液体槽交换转移到另一个液体槽。 一种是密闭式，即标本始终停留在一个固定的处理槽内，液体通过真空泵吸进吸出产生运动，从而对组织进行处理。 开放式存在着一定的安全隐患，而密闭式则相对安全。 密闭式通过控制面板的数字按钮，对标本进行电脑智能化控制，标本始终位于一个湿润的环境，即标本处理室内，不会发生人为的干燥干涸现象。 另外，配备自动报警装置，减少室内有害液体的直接排放。 密闭式的局限性在于，并非所有的液体都能适用于机器 。 密闭式处理模式能够提供加温、加压及搅拌等多项功能。 不过，虽然加温加压及搅拌等功能可以缩短组织标本的处理时间，但是在使用时一定要加以小心。 尤其是处理活检小标本时，更应如此。 如果把富含脂肪的组织与手术标本和活检小标本放在一起混合处理，效果不会理想。 反之，如果标本处理时间太短，也不能得到良好的组织处理效果。除非是小的、固定好的标本，才有可能得到良好的组织处理效果。 无论处理模式是开放的还是密闭的，组织处理的过程均应保持清洁，使用的液体应定时更换，保持工作的液面在指定的高度，不得高于或低于刻度线。 装有标本的包埋盒最好集中整齐放在提篮内，不能随意地放在标本处理室内，以免影响液体与组织之间的交换。 用于浸蜡的石蜡温度，最好控制在高于石蜡熔点的2~4℃左右，并且要每天检查测量并记录温度。 防止因温度过高，造成组织处理过度，使组织发生硬化或破碎等不良改变。 2．1脱水 脱水不彻底是组织处理最常见的问题之一。 脱水的原理和机制有二方面。 一是使用亲水性的试剂，从组织中吸收水分； 一是使用溶水性的试剂，不断从组织中溶解组织中的液体。 乙醇是常规组织制片最常用的脱水剂，如果时间宽裕，可从低浓度开始多换几道，这样可防止组织脱水过度造成扭曲。 如果时间紧凑，可从95%乙醇开始，接着行无水乙醇脱水。 通常的方案是从60~65%乙醇开始，换二道95%乙醇，二道无水乙醇。 如果使用的乙醇浓度高于70%，中性缓冲福尔马林中的磷酸盐，将会在组织中沉积，沉积的结晶会妨碍组织切片。 所以，组织脱水时应尽量避免在高浓度的乙醇如无水乙醇中停留的时间过长，否则会造成组织过硬、扭曲，影响切片。 图7：浸蜡不好 图