毛细管电泳仪组成结构分离模式及应用和高效液相色谱分离方法选择.PPT

第1节 高效液相色谱法的主要类型 一、化学键合相色谱法 2．分离原理 疏溶剂作用理论 二、离子色谱法 2．固定相与流动相 三、反相离子对色谱法 2．常用离子对试剂 第10章 高效液相色谱分离检测技术 学习目标 知识目标 掌握化学键合相色谱法、离子色谱法和高效液相色谱的定性与定量分析方法；熟悉高效液相色谱仪的组成结构及其工作原理，了解毛细管电泳法、毛细管电泳仪组成结构、分离模式及应用和高效液相色谱分离方法选择与应用。 技能目标 掌握高效液相色谱仪使用操作技术，会运用高效液相色谱分离检测的技术，能对高效液相色谱仪进行简单维护。 HPLC 固定相状态分 液-固色谱法（LSC） 液-液色谱法（LLC） 分离机制分 吸附色谱法 分配色谱法 离子交换色谱法 分子排阻色谱法 化学键合相色谱法 亲合色谱法 离子色谱法 化学键合相（chemically bonded phase）将固定液（含不同官能团的有机分子）利用化学反应键合到载体表面上，使其形成均一、牢固的单分子薄层而构成的固定相 1．键合相类型 载体-----硅胶 类型 非极性固定相 (ODS） 极性键合相 （键合-NH2、-CN、醇基等极性基团） 离子型键合相 （键合可交换阴或阳离子基团 ) 键合反应---硅烷化反应、硅酸酯化反应 （1）正相键合相色谱法 特征----固定相极性＞流动相极性 分离机制 ---类似液-液分配色谱的分离原理 应用范围---适于分离溶于有机溶剂的极性至中等极性的分子型化合物(如脂溶性维生素、脂、芳香醇、芳香胺等） （2）反相键合相色谱法 特征----固定相极性＜流动相极性 分离机制 ---“疏溶剂作用”理论 应用范围-----适用于分离非极性至中等极性的分子型化合物 流动相-----有机溶剂 流动相-----水+有机调节剂 利用非极性溶质分子或溶质分子中非极性基团和极性溶剂接触时产生排斥力，而从溶剂中被“挤出”，即产生疏溶剂作用，促使溶质分子与键合相表面的非极性的烷基发生疏水缔合，而使溶质分子保留在固定相中 . 想一想 影响溶质保留（时间长短）的因素有哪些? （1）溶质分子中非极性部分的总表面积 溶质和固定相接触的总表面积愈大，保留值愈大，所以溶质的极性愈弱，疏水性越强，保留值越大。 （2）键合相上的烷基总面积 烷基键合固定相的作用在于提供非极性的作用表面。随着碳链的加长，烷基的疏水特性增强，溶质的保留值也随烷基碳链长度的增加而增大。 影响溶质保留（时间长短）的四大主要因素 时间，min 固定相：C1 固定相：C8 固定相：C18 1-尿嘧啶；2-苯酚；3-乙酰苯；4-硝基苯；5-苯甲酸甲酯；6-甲苯 （3）流动相的表面张力 流动相的表面张力愈大，介电常数愈大，极性亦愈强；溶质和烷基键合相的缔合作用愈强，流动相的洗脱强度弱，导致溶质的保留值大。 （4）流动相的酸碱性和盐浓度 酸性抑制弱酸解离，增加保留时间；碱性抑制弱碱解离，增加保留时间；盐浓度增加不利于离子化溶质保留。 1.离子色谱法（IC） 离子交换色谱与电导检测器相结合分析各种离子的方法 2．分离原理[抑制型（双柱型)] 分离柱 交换反应：R+-OH- + NaX → R+-X-+ NaOH 洗脱反应：R+-X- + NaOH → R+-OH-+ NaX 抑制柱 与组分反应：R—H+ + NaX → R-Na+ + HX 与洗脱剂反应：R--H+ + NaOH → R-Na+ + H2O 在无抑制柱的离子交换色谱中，进入检测器的是高电导的洗脱剂NaOH及被洗脱的组分NaX，后者所产生的电导的微小变化被洗脱剂的高本底所淹没，难于检测。而加了抑制柱后，进入检测器的本底是电导率很低的水，因此很容易检测出具有较大电导率的HX。 （1）固定相 基质 ---合成树脂（聚苯乙烯）、纤维素和硅胶 离子交换剂 ----键合的离子交换基团 —NH2 WAX 弱阴离子交换剂 —N+R3 SAX 强阴离子交换剂 —COOH WCX 弱阳离子交换剂 —SO3H SCX 强阳离子交换剂 官能团 符号 类型 （2）流动相----水缓冲溶液 选择规则 (1)增加流动相中盐的浓度，可以降低待测离子的竞争亲和力，使其在固定相上的保留时间减少，先出色谱柱;反之，则保留时间增大，后出色谱柱 . （2）pH增大，酸的离解度增大而值增大，保留时间增加，后出柱；但有机碱的离解度降低而分配比减小，保留时间减小，先出柱。 (3)缓冲溶液中缓冲剂浓度增大 ;保留时间会减小。 1．分离机制 在反相色谱法中，将一种或多种与被