第五章植物花药与花粉培养.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 芸苔属植物Brassica napus不同基因型的小孢子产胚率比较 Topas 10,000-200,000 1-20 Westar 1000-10,000 0.1-1 Delta 100-10,000 0.01-1 Bounty 10-100 0.001-0.01 基因型 胚状体数量/106小孢子 成苗率（%） （二）供体植株生长条件和生理状态 1、植株生长条件 光温等因素均能影响花药培养力。一般 处于适宜生长条件（如温室中）较好。但物种间存在差异。 2、植株生长时期 一般是开花始期优于开花末期。 3、P花粉的频率 不同温度（低温）、日照时数（短日照）、氮饥饿及生长物质处理（乙烯利/诱导雄性不育）等可提高P花粉的数量 。 （三）花粉发育时期 小孢子发育时期对诱导雄核发育非常重要。 四分体: 醋酸洋红染色 四分体: Alexander’s 染色 单核期 双核期 成熟花粉粒 处于不同发育时期的烟草小孢子 单核晚期 ?液泡 第一次有丝分裂后期 双核早期 双核中期 ?生殖核 ?生殖核 营养核? 一般而言，单核期（第一次有丝分裂前）对诱导反应最敏感，为最佳培养期。 形成双核后，在合适的条件，主要由营养细胞分裂产生胚状体。 ? 不同物种诱导胚胎发生的最佳小孢子发育时期 发育时期 物种 减数分裂期 草莓、番茄 四分孢子期 葡萄 单核早中期 石刁柏、油菜、大麦、天仙子、马铃薯 单核晚期 荔枝、茄子、青椒、小麦 单核早期至晚期 烟草 单核早期至双核期 梨、水稻、甘蓝 四分孢子期至双核期 玉米 对不同发育阶段的花药进行培养测试 确定最佳小孢子发育时期的形态特征 注意形态特征会因品种、发育状态、环境条件的变化而发生变化 处于不同发育阶段的烟草花芽 花粉发育时期的确定 （四）预处理 预处理是小孢子培养成功的前提条件 预处理目的：是改变小孢子的发育方向，使尽可能多的小孢子从配子体发育途径转向孢子体发育途径（即成为具胚胎发生潜力的小孢子）。适当的预处理能使绿苗产量大量增加。 预处理方法：主要是对花药进行适度的逆境处理，包括低温、高温、化学物质、离心、射线等。 1、高低温处理 低温预处理（花粉饥饿）：指在接种之前将材料用0℃以上低温处理一段时间后再接种。应用较多。处理温度一般在1-14℃，时间从几小时至几十天不等。不同作物所用的预处理温度及时间差异较大。不同的处理温度需要不同的时间。 例子:小麦穗子培养前4℃预处理几天，花药培养效率显著提高。 十字花科未经低温预处理的花蕾，每花药产胚数为4.39个，6-9℃处理1天，产胚数提高到61.4个，预处理4天后，胚状体产量降为10.47个。 预处理方法： 高温处理（热击处理）：指花药接种后，先在较高温度下（30-35℃）培养数天，然后再移至正常温度下继续培养。 例子:如烟草，32℃高温；小麦，33℃高温预处理显著地提高了小孢子胚胎发生能力（Touraev，1996） 2、化学物质处理 包括高糖（提高愈伤组织的诱导率）、甘露醇、秋水仙素、乙烯利等进行处理。甘露醇仅能维持渗透压，不能提供碳源，其主要原理是造成小孢子营养饥饿，从而使小孢子去分化。 3、其它 包括γ射线、离心、磁场等。 （五）培养基 1.基本培养基 主要为N6和MS培养基。在此基础上发展出一些其它的培养基。如H培养基（适于烟草）、C17培养基（适于小麦）、马铃署-Ⅱ培养基（适于马铃署） 2.碳源 包括蔗糖、麦芽糖、纤维二糖、葡萄糖、果糖、海藻糖等。不同作物所需最适的碳源种类及浓度的所差异。一般认为单子叶植物比双子叶植物需糖的浓度要高。玉米中蔗糖效果最好；而麦类作物中，麦芽糖似乎为最好的碳源。 3、激素 2,4-D（愈伤与胚胎诱导的矛盾） 4、氨基酸 谷氨酰胺、丙氨酸、 5、活性碳 吸附作用 6、pH 弱酸性，因物种而异 （六）培养条件 1、温度 物种间有差异，比愈伤组织诱导高几度。 2、光照 红光对小孢子发育有利 3、植板密度 植板密度与花培效率有很大的相关性。5×103到2×104／ml密度均能有效培养