基 因 诊 断ppt课件.pptVIP

基因芯片技术 6. 杂交与清洗 5. 样品的标记 1. 探针的制备 2. 支持物的处理 3. 基因芯片的打印 4. 芯片打印后处理 7. 检测与分析 核酸序列分析 化学裂解法 (Maxam-Gillbert法) DNA链的末端合成终止法 (sanger法) 一、化学裂解法(Maxam-Gillbert法) 基本原理 基于某些化学试剂可以使DNA链在1个或2个碱基处发生专一性断裂的特性，精确地控制反应强度，使一个断裂点仅存在于少数分子中，不同分子在不同位点断裂，从而获得一系列大小不同的DNA片段，将这些片段经电泳分离。 分析前，用同位素标记DNA的5′末端，经放射自显影即可在X胶片上读出DNA链的序列。 二、DNA链末端合成终止法 三、DNA自动测序 采用荧光替代放射性核素标记是实现DNA序列分析自动化的基础。用不同荧光分子标记四种双脱氧核苷酸，然后进行Sanger测序反应，反应产物经电泳（平板电泳或毛细管电泳）分离后，通过四种激光激发不同大小DNA片段上的荧光分子使之发射出四种不同波长荧光，检测器采集荧光信号，并依此确定DNA碱基的排列顺序。 DNA自动测序 金标准 第三节 基因诊断在临床的应用 直接诊断 ---- 直接检查致病基因本身的异常 间接诊断 ----当致病基因未知，或致病基因虽然已知但其异常尚属未知时，可以通过对受检者及其家系进行连锁分析，以推断前者是否获得了带有致病基因的染色体。 基因异常 基因缺失 基因突变 基因突变又包括单个碱基置换、微小缺失或插入。 目前能开展的基于DNA的基因诊断 Alpha-1-antitrypsin deficiency (AAT; emphysema and liver disease) Amyotrophic lateral sclerosis (ALS; Lou Gehrigs Disease; progressive motor function loss leading to paralysis and death) Alzheimers disease* (APOE; late-onset variety of senile dementia) Ataxia telangiectasia (AT; progressive brain disorder resulting in loss of muscle control and cancers) Gaucher disease (GD; enlarged liver and spleen, bone degeneration) Inherited breast and ovarian cancer* (BRCA 1 and 2; early-onset tumors of breasts and ovaries) Hereditary nonpolyposis colon cancer* (CA; early-onset tumors of colon and sometimes other organs) Charcot-Marie-Tooth (CMT; loss of feeling in ends of limbs) Congenital adrenal hyperplasia (CAH; hormone deficiency; ambiguous genitalia and male pseudohermaphroditism) Cystic fibrosis (CF; disease of lung and pancreas resulting in thick mucous accumulations and chronic infections) Duchenne muscular dystrophy/Becker muscular dystrophy (DMD; severe to mild muscle wasting, deterioration, weakness) Dystonia (DYT; muscle rigidity, repetitive twisting movements) Fanconi anemia, group C (FA; anemia, leukemia, skeletal deformities) Factor V-Leiden (FVL; blood-clotting disorder) Fragile X syndrome (FRAX; leading cause of inherited mental retardation) Hemophilia A and B (HEMA and