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基因工程主要技术原理pcr技术ppt课件
第三节 PCR技术原理;2.3.1 核酸体外扩增最早的设想;2.3.2 聚合酶链反应的发明;2.3.3 PCR 原理;5’ amplicon 3’;Cycle 2 4 分子;2.3.4 PCR反应过程;denature dsDNA ssDNA 92-96℃?
annealing 37-72℃ 50-58℃?
extension 72℃ ;2.3.5 PCR反应体系;dNTP
终浓度0.2mM(即饱和浓度)（pH7.0）
4种dNTP应平衡，提高忠实性
使用时应考虑Mg2+，引物，产量之间的关系
如序列分析和制备探针时，用20-40μm
?
引物
各1μm，即1pmol/μl
OD260 dsDNA 50μg/ml（molecular cloning）
SsDNA 40μg/ml oligo 33μg/ml;引物;避免二级结构的形成
二聚体 二级结构
G/C和A/T分布尽管均匀，一般G+C% 45-55%
Oligo dT/oligo dC除外
其它，如5’末端，限制酶位点的长度
随机引物 6nt 10-12nt; 模 板;;连接介导PCR;逆转录PCR (retrotranscription PCR, RT PCR);锚定PCR (anchored PCR);反向PCR (inverse PCR,inPCR);;2.3.7 其它体外核酸扩增技术 ;2.3.8 PCR技术的应用;人类基因组工程：用散布重复序列产生DNA标志；遗传图谱的构建(检测DNA、 多态性或精子绘图)；物理图谱的构建；测序，表达图谱
法医：犯罪现场标本分析；HLA-DQ
肿瘤：胰癌、结肠癌、肺癌、甲状腺癌、黑色素瘤、血液恶性肿瘤
组织和群体生物学：遗传聚类研究；动物保护研究；生态学；环境科学；实验遗传学。
古生物学：考古与博物馆标本分析
动物学：动物传染病的诊断等
植物学：检测植物病原等 ; 2.3.9 PCR技术未来发展的方向;回答问题
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