龋病病因及其免疫预防.pptVIP

与武汉生物制品研究所合作正在进行防龋DNA疫苗的中试研究，小规模中试产品质量已达到《预防用DNA疫苗临床前研究技术指导原则》的要求。 1. 发酵工艺 用14升罐发酵，获得湿菌67克 用50升发酵罐发酵，获得湿菌450克 2. 质粒纯化工艺研究 （1）质粒的粗提:碱裂解法 防龋DNA疫苗的中试生产 （2）Ⅰ号柱层析：去除RNA、细菌蛋白、宿主菌基因组DNA （3）Ⅱ号柱层析：捕获超螺旋质粒 0D260/OD280大于1.75 细菌残余蛋白含量小于0.001ug/ug质粒 琼脂糖电泳后RNA肉眼不可见 超螺旋质粒含量＞80% （4）Ⅲ号柱层析：去除内毒素 内毒素降至≤0.01EU/ug 3. 建立了产品质量控制标准： 细菌蛋白定量检测方法 RNA残留检测方法 细菌残余DNA检测方法 内毒素检测方法 小规模中试产品 树突状细胞在靶向防龋DNA疫苗免疫中的作用机制研究 靶向防龋DNA疫苗编码的蛋白能否与树突状细胞特异结合？ 靶向疫苗对树突状细胞的免疫相关基因表达产生的影响。 粘膜免疫诱导部位和系统免疫部位的树突状细胞基因表达谱的差异。 扁桃体免疫 通过刺激腭扁桃体诱导免疫反应 兔扁桃体局部给予福尔马林灭活的 S.sobrinus 细胞能够诱导唾液免疫反应，明显降低S.sobrinus的感染（Fukuizumi et al.,1999） 重复扁桃体免疫能够诱导兔大小唾液腺中产生IgA抗体分泌细胞（Inoue et al., 1999） 小唾液腺免疫 唇、颊、软腭小唾液腺，它们具有与淋巴组织紧密相连的分泌导管 S.sobrinus GTF 局部用于年轻成人的下唇粘膜表面，与安慰剂组相比，免疫组在随后6周的时间里全唾液中的总链球菌比例明显降低（Smith and Taubman,1990） 直肠免疫 一个远端的粘膜免疫诱导位点，分布着高密度的淋巴滤泡 初步研究表明这一途径也能诱导针对GTF的唾液IgA反应.（Lam et al., 2001） 使用肛栓可作为幼儿使用鼻腔免疫的替代 皮下和其它系统免疫 最初使用 S.mutans 全细胞作为免疫原; 为了避免产生心脏交叉反应性抗体，亚单位疫苗和多肽疫苗被用于系统免疫以控制龋齿; 大鼠唾液腺周围皮下注射GTF或合成肽诱导了高水平的血清和唾液IgA反应，抑制了致龋菌口腔定植和龋病发生（Taubman et al.）。 免疫效果评价 体内研究： 唾液中特异性的sIgA抗体水平（ELISA） 是否干扰致龋菌在牙面的定植（细菌培养计数） 龋齿动物模型的患龋水平（Keyes记分） 体外研究： 免疫血清/唾液引起致龋菌的凝集 抑制致龋菌在羟磷灰石表面的黏附 影响生物膜的形成和结构 免疫防龋研究方向 主动免疫防龋（防龋疫苗） 亚单位疫苗 合成肽疫苗 细菌活载体疫苗 DNA疫苗 被动免疫防龋 在牛奶或鸡蛋黄中产生针对变形链球菌的抗体 鼠单克隆抗体 牛奶多克隆抗体 鸡蛋黄IgY抗体 被 动 免 疫 construction of GTase-I overexpressing strain B29-33 ? intramuscular immunization ? specific cow milk antibodies ? mouth rinsing ? colonization level of S.mutan on teeth surface ? Effect of specific bovine milk antibodies against dental caries killed S.mutans, S.sobrinus whole cells ? ? egg yolk