冰冻切片中常见的一些问题了解.pptVIP

Page ? * 冰冻切片中常见问题分析 临安人民医院 1、组织取材对制片的影响 组织取材大小：组织块大小要适宜，冷冻切片机内切片刀移动的范围有一定的限制，超出其范围时，易致切片不全。一般情况下，冰冻切片的组织大小为1.5×1.5㎝,厚2㎜。但卵巢肿瘤及脂肪组织可稍微大些。组织块过大，切片时阻力过大，易产生皱折，刀痕，组织易崩碎，增加制片难度，影响诊断。如需在同一标本托上放大于两块组织时，应尽量冻成一个平面，与刀锋平齐，以防切片不完整，发生漏诊。若送检组织过小，请预先速冻一冷台面，再行包埋，利于制片。另外，包埋时，应将组织平放在冻头的中央。 组织内含过多的脂肪或坏死组织：脂肪或坏死组织较一般的组织冷冻的温度要低些，当活组织达到所需的温度时，其还比较软，从而影响切片的完整性和拖延冷冻报告发出的时间。 组织块过冷：组织冷冻过度易致切片破碎或呈粉沫状，不能制作一张完整的切片。 组织块冷冻不均匀：在配合使用液氮时，组织块放入液氮时不能保持水平状态且液氮量不足的情况下，可产生此现象。 冻头的温度不足：冷冻切片时要求冻头的温度保持在－25℃～－30℃左右，冻头的温度达不到要求时，组织很快回软，也不能保证切片的完整。 2、冷冻时间对制片的影响： 根据组织块的大小、性质，确定冷冻时间，一般13～17s（使用液氮者），若组织较大或脂肪组织时间可适当长些，而甲状腺、脑组织和淋巴组织等冷冻的时间相对要短些。冷冻时间要严格掌握，时间过长，切片易脆碎，其处理方法是：切出完整平面后用戴乳胶手套的拇指按压回温，直到切片完整为止，反之，时间过短，则需继续冷冻，直到组织不粘刀片出现完整切片为基准。 3 、冷冻箱体工作温度对制片的影响： 一般组织设定为－18～－20℃。但对一些较特殊的组织标本，温度应适当调整，如脂肪成分较多的组织以－30～－35℃为宜，纤维腺瘤，子宫等为－20℃，淋巴结，甲状腺为－18℃，切片时，表面玻璃机器盖子不要打开过大，以免箱体回温过快，影响制片。保持冻箱的温度，做到每次做完冷冻切片应关好冷冻箱的盖子。 4、染色对制片的影响： 尤以细胞核的染色最为关键，在寒冷的冬季，室温过低时，影响核的着色，可适当加温，用以增色，苏木素的酸碱度应适宜，经常观察其染液的ph值，过碱时应及时更换，盐酸酒精分化适度，时间控制到位，否则易造成核着色不佳，染色质不清晰，影响诊断的准确性。 5、冰晶的形成对制片的影响： 此原因主要取决于组织含水量的大小，尤以组织细胞水肿，淋巴结，纵隔肿瘤，卵巢肿瘤为甚，送检取材过程中接触水源，速冻过程中使用的液氮时间尚未控制好，同是造成冰晶形成的原因，其解决方法为，使用液氮时间上控制到位，保证一次冻透标本，组织送检取材时，尽量避开水源，如遇含水量高的标本时，应尽量用干纱布吸干水分后再行冷冻，避免由于冰晶形成出现诊断上的失误。操作者的动作应迅速。 6、切片皱缩或卷缩： 这也是影响切片质量的重要因素之一。常见的原因有：①刀锋变钝。② 防卷板粘有异物，防卷板的作用是防止切片卷缩，但若粘有异物，切片时组织会被挤压而缩在一起。③ 防卷板与刀锋的位置不平行、不协调。④ 组织块包埋不完全，缺乏支撑作用。 预防与处理的方法：① 注意检查刀具，及时更换刀口，定期磨刀。② 保持防卷板的清洁，每做一例冷冻切片，均应将刀口及防卷板拭擦干净，防止切片的污染和切片皱缩。③ 调整刀、防卷板的位置，保证两者平行，且防卷板比刀锋前0.2㎜左右。④ 包埋组织应完全，没法切片者再滴加包埋胶。 7、切片脱落： 冷冻切片是利用温度差（即玻片与组织切片的温度差）将切片粘贴在玻片上，然后进行固定、染色。下面几种情况下可影响切片粘贴的牢固程度，而导致切片脱落：① 组织内含过多的坏死组织。组织细胞坏死崩解后，局部的渗透压升高，吸收水分，切片一经固定，水分逸出，坏死组织失去支撑作用，染色时组织容易脱落。② 固定液浓度过低，这是最常见的原因。③ 载玻片不干净。④ 切片太厚。 Page ? *