郜刚分子生物学06dna端粒的复制幻灯片课件.pptVIP

线性染色体端粒DNA的复制;线性DNA复制后的问题;染色体末端缩短;端粒;端粒的生物学意义;染色体末端端粒随着每次细胞分裂逐渐缩短，直到不能分裂走向衰老。这就是人类细胞衰老的原因之一。但是人类的种系细胞一生中都能维持分裂、不断增殖。其原因在于：该细胞表达端粒酶。 端粒酶以自身一段RNA为模板，通过逆转录酶，转录出一段端粒片段并使之连接于染色体的端粒末端，使端粒不缩短，维持完整，从而保持了细胞的永生化生长。 在单细胞生物、多细胞生物的种系细胞中都显示出弱的端粒酶活性。而在人类正常体细胞均无端粒酶活性。值得注意的是，在绝大多数恶性肿瘤细胞中显示明显的端粒酶活性，这可能是肿瘤细胞具有永生性生长的原因之一。 ;端粒的合成主要依靠端粒酶来催化;端粒复制的爬行模型;端粒酶的爬行模型（动画演示）;;母链藉非标准碱基配对回折;; 如上图所示, (a)端粒酶以其RNA为模板, 通过逆转录作用, 催化富含G链的延伸; (b)端粒酶向端粒新3′端移动,继续以其RNA为模板, 催化富含G的DNA母链延长; (c)端粒酶反复移位, 通过逆转录反应使端粒富含G链增长到足够长度; (d)富含C链的空缺部分不需要引物酶合成引物提供3′-OH, 而是富含G的链突出的寡脱氧核苷酸d(GGGGTTTTGGGG)通过非Watson-Crick配对方式自身的GGGG之间按G · G配对, 回折形成发卡并提供3′-OH; (e)由发卡引发富含C链在3′-OH以富含G链为模板, 由DNA聚合酶添加新的dNTP, 进一步延伸填补空缺, 间隙最后由DNA连接酶封口; (f)端粒DNA与端粒蛋白结合, 完成加工后, 形成完整的端粒。 ;; 如上图所示, (a)端粒酶以其RNA为模板, 使用右边的AAC与新掺入的TTG配对, 催化富含G链的延伸; (b) 端粒酶向端粒新3′端移动, 此时模板RNA左边的AAC与3′端新掺入的TTG配对; (c) 端粒酶在模板RNA指导下将6个一组GGGTGG添加到端粒G链3′端, 重复(a) ～(c)反应使端粒富含G链增长; (d) 富含G链充分延伸, 而空缺的富含C链部分由引物酶合成引物RNA, 其序列互补于富含G链3′端; (e) 在新合成引物引发下, DNA聚合酶合成DNA用以填补端粒富含C链的缺口; (f) 引物被切除后, 对应的富含G链突出10～16个核苷酸; (g) 这种带重复序列的端粒DNA与端粒蛋白结合后, 通过G·G配对自身回折在染色体末端形成套索结构(t环, telomere loop)。 ;附加：反转录作用（RNA指导的DNA合成）;+; 反转录酶是多功能酶，兼有3种酶的活性： RNA指导的DNA聚合酶活性 DNA指导的DNA聚合酶活性 核糖核酸酶H的活性，专一水解RNA-DNA杂交分子中的RNA，可沿5 ?3和3 ?5两个方向起核酸外切酶的作用。; cDNA：利用反转录酶可合成出与任何RNA模板（mRNA，tRNA或rRNA）的碱基序列互补的DNA－－互补DNA（complementary DNA, cDNA）。 几乎所有真核生物mRNA分子的3 末端都有一段polyA, 当加入寡聚dT作为引物时，mRNA就可作为模板，在反转录酶催化下在体外合成与其互补的cDNA，为研究真核结构基因提供了有效途径。;反转录酶发现的理论和实践意义：