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园林植物组织细胞培养 绪 论 0.1 植物组织培养的概念 广义来说：植物组织培养，不仅包括在无菌条件下利用人工培养基对植物组织的培养，而且包括对原生质体、悬浮细胞和植物器官的培养。 植物学家把组织培养分为5种类型： 1) 愈伤组织培养 2) 悬浮细胞培养 3) 器官培养(胚、花药、子 房、根、茎 等) 4) 茎尖分生组织培养 5) 原生质体培养 植物细胞和动物细胞在结构上有很多区别, 在生理特性上也不完全一样, 动物细胞的分化一般都是不可逆的。 脱分化：一个成熟细胞转变为分生状态的过程。 外植体：由活植物体上切取下来以进行组织培养的植物组织或器官。 细胞全能性： 任何具有完整的细胞核的植物细胞，都拥有形成一个完整植株所必须的全部遗传信息。 ? 一个已分化的细胞要表现它的全能性，必须经历两个过程：首先要经历脱分化过程；再经历再分化过程。 0.2 发展简史： 0.2.1探索阶段： 20世纪初，德国植物生理学家Haberlandt提出了高等植物的器官和组织可以不断分割，直至分到单个细胞的观点，并设想离体细胞具有再生完整细胞的潜力。? 0.2.2 奠基阶段 　　20世纪30年代中期，植物组织培养领域里出现了两个重要的发现： 1）认识了B族维生素对植物生长的重要意义； 2）发现了生长素是一种天然的生长调节物质。 用3种B族维生素（吡哆醇、　硫胺素、烟酸）取代酵母浸出液获得成功。 20世纪40年代，科学家Overbeek等（1941年）首次把椰子汁作为补加物引入到培养基中，使曼陀罗的心形期幼胚能够离体培养至成熟。 ? 0.2.3迅速发展阶段 （20世纪60年代至今 ）20世纪60年代以来组织培养技术的发展，概括成以下4个方面： 1） 基础研究再奏凯歌 2） 原生质体培养研究取得重大 突破 3） 花药培养取得显著成绩 4） 微繁技术得到广泛利用 0.3 植物组织培养的目的 0.3.1 进行脱毒培养 0.3.2 快速繁殖 0.3.3 利于引种 0.3.4 培养名贵花卉 药材 1 植物组织培养的基本技术 1.1 实验室的建立 1.1.1 实验室的设计方法 (1)???实验室选址要求 大气条件好; 空气污染少; 水源充足; 交通便利; 供电充足等。 （2）总体布局 做到：分区布置、工作方便、减少污染、安全美观。 1.1.2 实验室设计要求 要求设计合理、节省能源、使用方便、清洁卫生。 1.1.3 实验室的组成 （1）综合实验室 （2）接种室 （3）培养室 （4）洗涤室 （5）灭菌室 1.1.4 实验室仪器、设备组成 (1)??? 超净工作台 (2)??? 灭菌器 (3)? 高压灭菌锅 (4)? pH计 (5)? 普通冰箱----储存各种化学药品 (6) 低温冰箱 (7)? 天平 (8)? 接种用具（镊子、解剖刀、解剖针、剪刀、酒精灯等） (9) 电热磁力搅拌器----用以溶解化学药品 （10）各种玻璃器皿和大塑料瓶 （储存蒸馏水） 在组织培养中只使用硼硅酸盐玻璃器皿，钠玻璃对植物的组织可能会导致毒害，重复使用时可能毒害更严重。 （11）摇床 超净工作台原理：内装有一小电动机，它带动风扇鼓动空气先穿过一个粗过滤器，把大的尘埃滤掉；进而再穿过一个高效过滤器的细过滤器，把大于0.3微米的颗粒滤掉，然后这种不带真菌和细菌的超净空气吹过台面。由高效过滤器吹出来的空气速度大约是（27±3）m/min，这个气流速度足以阻止工作区域被操作人员所污染，所有的污染物都会被这种超净气流吹跑。 1.2???? 培养基的成分 1.2.1?? 水 1.2.2??? 无机营养成分 大量元素（培养基中含量超过100mg/L的无机元素）：有N、P、K、Ca、Mg、S 微量元素：Fe、B、Mn、Zn、Cu、Mo等。 1.2.3 有机营养成分 1) N 源 为了植物组织正常生长，在培养基中必须加入合适的维生素和氨基酸，如: 盐酸硫胺素（VB1）、盐酸吡哆醇（VB6）、烟酸（VB3）、泛酸钙（VB5）、肌醇、甘氨酸等。 为促进愈伤组织和器官的生长，常在培养基中添加化学成分不明的复杂营养物，如： 水解酪蛋白（CH）、椰子汁（CM）、番茄汁（TJ）、酵母浸出液（YE）等。 2） C源 在培养基中加入一种可被利用的C源是十分必要的。常用的C源是蔗糖、葡萄糖，使用浓度为2%～5%。 以蔗糖为C源时，离体的双子叶植物的根长势良好；以葡萄糖为C源时，单子叶植物根长势好。 1.2.4 植物生长调节剂 1） 生长素