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蛋白质质谱
一.概述
• 蛋白质组学中的质谱鉴定,是使用生物质谱技术对特异
性酶解的多肽分子进行分析,从而得到对应的序列信息
• 质谱分析分成两种
– 多肽分子的质量电荷比的测量( fullscan 和PMF)
– 多肽分子的碎片分子的质量电荷比测量(MS/MS质谱
图谱)
生物质谱原理
基本原理:
将样品分子离子化后,根据不同离子间质荷比(m/z) 的差异
来分析蛋白质和多肽的分子量和对蛋白质进行鉴定, 定量及
其修饰点分析。一台质谱仪一般有进样装置,离子化源,
质量分析器,离子检测器和数据分析系统组成。
串联质谱
数据处
离子源 质量分析器 质量分析器 检测器
理系统
质量选择器
Tandem in Space Tandam in Time
• QQQ • Ion Trap (2D, 3D)
• Q-Trap • FTICR
• Q-TOF • Trap-FT
• IT-TOF
• TOF-TOF
生物质谱分类
进样系统
不连续进样:适用于固体 连续进样:分析样品连续进入
或高沸点液体 GC/MS,LC/MS
MALDI
离子化方式
热稳定化合物 热不稳定化合物
电子离子化(EI) 快原子轰击离子化(FAB)
化学离子化(CI)
基质辅助激光解析离子化(MALDI)
质量分析器 电喷雾离子化(ESI)
双聚焦分 四级杆质 离子阱 傅立叶回旋共振 飞行时间
析器 量过滤器 (Ion Trap)(FT-ICR) (TOF)
二.蛋白质质谱鉴定的常规流程
• 蛋白质胶内酶解
• 质谱分析
• 数据库查询
• 生物信息学分析(可选)
蛋白质点的胶内酶解
• 凝胶的脱色
– 考染
– 质谱兼容的银染
• 凝胶点的缓冲液转化
• 加入胰蛋白酶
• 抽提多肽分子
三.质谱分析
• MALDI-TOF 分析(PMF)
• MALDI-TOF/TOF 分析
• LTQ 分析
• 其他质谱分析(Q-TOF 等)
MALDI-TOF 和MALDI-TOF/TOF 分析
基本原理
• MALDI-TOF/TOF (Matrix-Assisted Laser Desorption/ Ionization Time
of Flight Mass Spectrometry, 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱)
仪器主要由两部分组成:基质附助激光解吸电离离子源(MALDI)和
飞行时间质量分析器(TOF)。
• MALDI 的原理是用激光照射样品与基质形成的共结晶薄膜,基质从激
光中吸收能量传递给生物分子,而电离过程中将质子转移到生
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