慢病毒介导的bmi-1基因沉默对骨髓瘤细胞生物学特性及硼替佐米敏感性影响的研究-effects of lentivirus-mediated bmi - 1 gene silencing on biological characteristics and bortezomib sensitivity of myeloma cells.docxVIP

下载本文档

4
0
约5.89万字
约 58页
2018-07-27 发布于上海
举报
版权申诉

慢病毒介导的bmi-1基因沉默对骨髓瘤细胞生物学特性及硼替佐米敏感性影响的研究-effects of lentivirus-mediated bmi - 1 gene silencing on biological characteristics and bortezomib sensitivity of myeloma cells.docx

1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击这里二次下载。
3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次，网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档

慢病毒介导的bmi-1基因沉默对骨髓瘤细胞生物学特性及硼替佐米敏感性影响的研究-effects of lentivirus-mediated bmi - 1 gene silencing on biological characteristics and bortezomib sensitivity of myeloma cells

目录英文略缩词……………………………………………………………………2中文摘要………………………………………………………………………3英文摘要………………………………………………………………………5前言……………………………………………………………………………7第一部分Bmi-1shRNA慢病毒表达载体的构建及稳转骨髓瘤细胞株的建立引言………………………………………………………………………9材料和方法………………………………………………………………10结果………………………………………………………………………19讨论………………………………………………………………………21结论………………………………………………………………………24第二部分Bmi-1基因沉默对骨髓瘤细胞生物学特性及增强骨髓瘤细胞对硼替佐米敏感性的机制研究引言………………………………………………………………………25材料和方法………………………………………………………………26结果………………………………………………………………………29讨论………………………………………………………………………39结论………………………………………………………………………42全文总结………………………………………………………………………43参考文献………………………………………………………………………44致谢……………………………………………………………………………50综述Bmi-1基因在多发性骨髓瘤中的研究进展…………………………511英文略缩词(Abbreviationsandacronyms)英文略缩词英文全称中文译名RNAishRNARNAinterferenceshorthairRNARNA干扰短发夹RNAshBmi-1Bmi-1shRNABmi-1干扰ControlGFPControlGreenFluorescentProtein对照组绿色荧光蛋白3’UTR3’untreatedregion3’非翻译区qRT-PCRReal-timeQuantitativeReverseTranscriptionPCR实时荧光定量PCRddH2Odoubledistilledwater双蒸水mRNAmessengerRNA信使RNALBLuria-BertainmediumLB培养基cDNAcomplementaryDNA互补DNACCK-8CellCountingKit-8细胞计数试剂盒Tristris(hydroxymethyl)aminomethane三羟甲基氨基甲烷SDSSodiumDodecylSulfate十二烷基硫酸钠TEMEDetramethylethylenediamine四甲基乙二胺WBWesternBlot蛋白质免疫印迹PBSPhosphateBufferedSolution磷酸盐缓冲液DEPCdiethylpyrocarbonate二乙基焦磷酰胺TBSTTris-BufferedSalineTween-20三羟甲基氨基甲烷缓冲液MMMultipleMyeloma多发性骨髓瘤BorBortezomib硼替佐米IC50halfmaximalinhibitoryconcentration50%抑制率的药物浓度HSCsHematopoieticstemcells造血干细胞CSCsCancerstemcells肿瘤干细胞2慢病毒介导的Bmi-1基因沉默对骨髓瘤细胞生物学特性及硼替佐米敏感性影响的研究摘要目的：构建Bmi-1shRNA慢病毒表达载体以沉默Bmi-1基因的表达，建立稳定干扰Bmi-1基因的骨髓瘤细胞株；研究Bmi-1基因沉默对骨髓瘤细胞株U266和RPMI8226生物学特性及对硼替佐米敏感性的影响及其机制。方法：设计合成一对针对Bmi-1mRNA的shRNA序列，利用分子克隆技术构建慢病毒表达载体—pLVTHM-shBmi-1，空载体作为对照组，分别与包装载体psPAX2及PMD2.G共转染HEK293T细胞，包装出高滴度的病毒颗粒；感染骨髓瘤细胞株U266和RPMI8226，经过流式细胞仪分选获得稳定细胞株。接着应用real-timePCR和Westernblot分别从mRNA和蛋白水平检测Bmi-1及p14的表达；CCK-8法检测稳定株细胞增殖；克隆形成实验检测稳定株细胞克隆形成能力；流式细胞术(FCM)检测稳定株细胞周期和凋亡的变化；AO/EB染色、Hoechst33258荧光染色法观察稳定株细胞凋亡形态；Westernblot检测P21、Bax和Bcl-2蛋白水平改变。进一步，采用CCK-8法、克隆形成法、流式细胞术和荧光染色法分别从细胞增殖、克隆形成、细胞周期和凋亡、Westernblot等方面研究Bmi-1基因沉默对骨髓瘤细胞硼替佐米敏感性的影