蒙古马不同类群mxa基因的部分外显子多态性分析及mxa基因真核载体的构建-polymorphism analysis of some exons of mxa gene in different groups of mongolian horses and construction of eukaryotic vector of mxa gene.docxVIP

1.2.3MxA基因的应用和展望MxA蛋白已经开始临床应用，在儿科领域MxA蛋白因敏感性强、半衰期长、特异性高、检测方便等特性作为鉴别病毒与非病毒感染的指标，病毒感染时内源性IFN明显升高，因FN半衰期短而未能通过检测作为临床的检测指标。MxA蛋白是IFN诱导的蛋白，可以反映内源性IFN状态叭雷瑞祥(5)等用竞争分化聚合酶链反应技术为基础的方法对人的MxA-88G/T罪1:1IFN-y+874A/T基因分型，研究常见影响乙型肝炎病毒(HBV)感染自然转归的宿主遗传因素在地方性流行区的作用。研究结果显示人的MxA-88G/T的基因型在自限性感染者和慢性HBV感染者中的分布差异有高显著性;然而，IFN-y+874A/T的基因型在两者中的分布差异无显著性，常见影响HBV感染自然转归的宿主基因多态性在地方性流行区的作用有所改变。与人的IFN-y+874A/T相比，人的MxA-88G/T多态性有可能成为乙型肝炎预后和药物泊疗应答的预测指标。黄雁翔(11)等用MxA基因作为边传标志，应用多聚酶链式反应(PCR)及限制片段长度多态性(RFLP)方法，检测患者人的MxA启动子-88位点的SNP，以探讨IFN治疗的不同疗效与患者SNP的关系，研究结论为人MxA启动子-88位点为GT杂合基因型的CHB患者对IFN治疗反应好。为患者提供选择IFN治疗的分子生物学证据，为预后判断及个性化泊疗提供参考依据。王宏伟(10)等用病例对照方法.采用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性分析研究人的MxA基因启动子-88位点的G/T多态性。研究发现人的MxA基因启动子-88位T等位基因可能是SARS发病的易感基因。这提示人类MxA蛋白可能参与SARS冠状病毒的感染和致病过程。通过对SNP的研究，司从基因水平揭示不同个体间生物活性物质的功能及效应存在差异的本质，不仅可以为临床提供诊断依据，还可以预测某些疾病和指导治疗的个体化。Jikata等(12)在体外研究中通过荧光报告基因实验发现，人MxA基因启动子区-88位T等位基因可以促进MxA蛋白的表达。TerMeulen等[13J发现高水平的MxA蛋白会抖l制麻摩病毒的转录和蛋白表达，同时阻止机体免疫系统对麻摩病毒感染细胞的消除，从而使病毒在细胞内持续存在。这说明含有人MxA基因启动子-88位T等位基因的人群在感染麻菇病毒时可能会因为体内MxA蛋白的高表达而使麻痊病毒难以被捕除，因而其忠相关疾病的可能性要高于不含T等位基因的人群。随着生物技术的高速发展，MxA蛋白及其抗体的研制、诱导及检测方法逐步建金，不仅可以鉴别诊断临床病毒性感染的早期诊断及病毒和细菌感染，还可以测定IFNa/?效价及IFNα/?临床疗效。更重要的是可以通过克隆MxA蛋白的基因和采用基因重组技术，制备MxA抗病毒蛋白制剂，直接发挥抗病毒作用，其更优于干扰素的间接作用，在l临床应用和l研究中具有广阔的发展前最。1.3本实验的目的和意义有关Mx基因的研究，到现在为止主要是集中在人和l鼠Mx基因的克隆、结构功能、多态分析及其与干扰素诱导关系等方面。Mx蛋白的GTP酶活性区域内发生变化，会引起;lt抗病毒活性的改变IHI，外界因素干扰改变某些动物Mx基因序列的一个碱基，就会使Mx蛋白丧去对某种病毒的抗病毒活性。关于鸡Mx基因碱基序列的研究发现，鸡MxcDNA序列的第2032碱基由A突变成G时，所编码氨基酸由丝氨酸变成天冬氨酸，从而导致Mx蛋白失去抗病毒活性(18)。利用MxA基因培育的抗流感病毒转基因猪取得成功(19)。国内外马Mx基因的研究报道有:马细胞质中有MxA和MxB2类Mx蛋白(14);已经从马外用血淋巴细胞中克隆并测定了马MxAcDNA序列I叫:菊林花等用cDNA核背酸序列测定法，找出了国外品种马碱基序列的突变位点IM10萨仁高娃等用PCR-SSCP的方法分析了不同品种马MxA基因的部分外显子的多态性。但目前还是未确定马属动物的MxA基因序列的差异及其作用机制。基因的碱基序列的改变是动物性状变化的基础，如果碱基序列的发生变化可能意味着遗传信息也跟着发生改变。为此要通过对不同品种和多个个体基因进行分析比较才能找出彼此的差异，得到准确司筝的结果。所以对马MxA基因的多态性进行分析及其抗病毒作用机制的研究在马周动物抗性基因的选择具有理论价值和重要具体意义。构建MxA基因重组县，核表达载体是MxA蛋白抗体的研制、制作MxA抗病毒蛋白药物、通过转基因技术培育抗病动物等奠定理论基础。因此本研究为预防和治疗马流感，培育抗流感病毒的品种提供基础;资料，也为其它家畜抗病毒基因的研究提供参考资料。内蒙地区的地方品利蒙古马具有很强的抗病毒的优势，以地方品种蒙古马为主要研究对象，对马来11的MxA蛋白基因进行研究不仅有理论价值，而且有广阔的应用前景。;;j王实验采用PCR