慢病毒介导stat3-shrna对胃癌细胞化疗敏感性的影响及机制-effect and mechanism of stat 3 - shrna mediated by lentivirus on chemosensitivity of gastric cancer cells.docxVIP

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2018-07-27 发布于上海
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慢病毒介导stat3-shrna对胃癌细胞化疗敏感性的影响及机制-effect and mechanism of stat 3 - shrna mediated by lentivirus on chemosensitivity of gastric cancer cells

英汉缩略语名词对照英文缩写英文全称中文全称FBSFetalbovineserum胎牛血清PBSPhosphatebuffersolution磷酸盐缓冲液RMPI1640RoswellParkMemorialInstitute1640RMPI1640培养基AnnexinV-PEAnnexinVPhycoerythrin膜联蛋白V-藻红素荧光素BSABovineserumalbumin牛血清白蛋白STAT3Signaltransducersandactivatorsoftranscription3信号传导及转录激活因子3Bcl-2B-celllymphoma-2B淋巴细胞瘤-2GFPGreenFluorescentProtein绿色荧光蛋白MDRMultidrugresistance多药耐药性MMPmatrixmetaloproteinases基质金属蛋白酶EGFRepidermalgrowthfactorreceptor表皮因子生长受体Mcl-1Myeloidcellleukemia-1髓细胞白血病基因-1VEGFVascularendothelialgrowthfactor血管内皮生长因子DMSODimethylsulfoxide二甲基亚砜DNADeoxyribonucleicacid脱氧核糖核酸HRPHorseradishperoxidase辣根酶过氧化物BpBasepair碱基对MTT3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-yl)-3,5-diphenytetrazoliumoromide噻唑蓝试剂ODOpticaldensity光密度值PCRPolymeraseChainReaction聚合酶链式反应1慢病毒介导STAT3-shRNA对胃癌细胞化疗敏感性的影响及机制摘要目的:目前，胃癌已发展为世界上最常见的恶性肿瘤之一，致死率在恶性肿瘤中居于第二位[1]。随着医疗技术发展，早期胃癌生存率较前显著提升，但晚期胃癌生存率却不容乐观，晚期或转移型的胃癌患者5年生存率仅为5-20%[2]。对于此类患者而言，化疗是其临床治疗策略的关键。化疗主要通过诱导肿瘤细胞凋亡从而发挥抗肿瘤作用，但由于肿瘤细胞先天或者获得性对化疗耐受，导致胃癌临床化疗效果差，生存率改善不明显。临床上仅通过改变化疗药物组合的方式对癌细胞耐药的改善作用十分有限，迫切需要对如何改善胃癌细胞的化疗敏感性进一步探索。随着分子生物学的快速发展，对胃癌分子特征的研究不断深入，能否在基因水平上逆转胃癌细胞的化疗抵抗性引起了广泛科研工作者关注。信号传导及转录激活因子3（signaltransducersandactivatorsoftranscription3，STAT3），是转录因子家族中的一员，在多种生理及病理过程中扮演着调节器的关键作用。STAT3基因通过转位到细胞核，与特定的启动子序列结合，从而发挥转录调控作用，参与调节细胞的增殖、分化、凋亡、血管生成等生理过程[3]。最近的研究表明，STAT32与多种肿瘤细胞的化疗抵抗性有关，但是否在胃癌细胞中也能诱导化疗耐受并不明确。方法:1.首先构建靶向STAT3基因的shRNA干扰序列，以慢病毒为载体介导STAT3-shRNA转染胃癌SGC-7901细胞。以real-timePCR及westernblot检测STAT3-shRNA干扰效果。2.通过MTT法分析干扰STAT3表达后胃癌SGC-7901细胞对5-氟尿嘧啶（5-Fu）化疗敏感性的变化；用流式细胞分析仪比较细胞凋亡率的差异；最后通过westernblot检测抗凋亡蛋白Bcl-2、Mcl-1及survivin的变化，初步探讨相关机制。结果：成功构建靶向STAT3基因的慢病毒载体并转染SGC-7901细胞，有效抑制55％STAT3mRNA表达和40％STAT3蛋白表达（P＜0.05）。MTT及流式细胞仪检测显示干扰STAT3表达后可抑制胃癌SGC-7901细胞增殖，促进肿瘤细胞凋亡(P＜0.05)，westernblot显示STAT3下游靶基因Bcl-2、Mcl-1及survivin蛋白表达水平显著下降（P＜0.05）。结论：慢病毒介导的STAT3-shRNA可阻断人胃癌SGC-7901细胞的STAT3信号通路，抑制肿瘤细胞增殖，诱导其凋亡，下调该通路下游的抗凋亡蛋白Bcl-2、Mcl-1、survivin的活性，导致SGC-7901细胞对5-Fu的化疗敏感性增强。关键词：STAT3，慢病毒，化疗敏感性，抗凋亡蛋白3LENTIVIRAL-SHRNA-MEDIATEDSTAT3SILENCINGENHANGCESCHEMOSENSITIVITYTO5-FLUOROURACILINHUMANGASTRICCANCERCELLSABSTRACTObjective