内皮素3对恶性黑素瘤a375细胞上皮基质转化影响-effect of endothelin 3 on epithelial matrix transformation of malignant melanoma a375 cells.docxVIP

独创性声明本人郑重声明，本学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果的总结。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本人将承担本声明引起的一切法律后果。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本论文属于保密□，在年解密后适用本授权书。不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日前言关于肿瘤转移的经典观点是：从一个原发于上皮的新生物开始，包括以下几步：1）上皮基质转化（EMT），破坏基底膜屏障；2）肿瘤细胞从原发肿瘤中分离；3）肿瘤细胞侵袭邻近组织；4）侵入血管内，并形成新生的血管及淋巴组织；5）肿瘤细胞在血管内随着血流转运;6)通过小血管及淋巴管等转移至血管外；7）播散的肿瘤细胞在继发位点固定；8）肿瘤细胞先形成微转移，继而进一步生长成继发肿瘤【1】，如图1。大约90%的实体肿瘤来源于上皮组织。当一个良性或原位肿瘤转变为恶性兼具有侵袭性的肿瘤时，最明显的形态改变是肿瘤细胞从一个高分化的上皮形态向具有转移及侵袭表型的间质形态转变。之后，肿瘤细胞开始从瘤体中分离，并破坏基底膜，侵入邻近组织【2,3】。在这个过程中，侵袭性的增加通常伴随着肿瘤细胞失去上皮细胞的特性而向具有移行能力的间质细胞表型分化，也即上皮基质转化。上皮基质转化不但发生在胚胎的形成及发育、组织再生及器官纤维化，而且在各类肿瘤如卵巢癌、乳腺癌、肝癌、一些皮肤肿瘤如皮肤鳞状细胞癌、基底细胞上皮瘤及恶性黑素瘤中也存在，但EMT在大多数肿瘤中还未得到证明【4，5】。上皮基质转化是肿瘤发生侵袭和转移的关键一步。上皮基质转化首先要鉴别的是细胞形态改变。上皮细胞多表现为一种多角形，这对于其生物功能如：内吞、胞吐及囊泡的转运非常重要。上皮细胞基底侧和其邻近细胞紧密接触形成保护屏障。而基质型细胞有易于细胞迁移的形态特征，长梭形。上皮基质转化特征是上皮细胞标志分子如：细胞角蛋白（Cytokeratins，CK），E-钙黏素（E-cadherin）等表达下降【8~10】。而间质细胞标志分子如：a-SMA，FSP1（Fibroblastspecificprotein1）、波形蛋白（Vimentin）、N-钙黏素等表达升高【11】。E-钙黏素表达改变是上皮基质转化重要标志，其表达降低与肿瘤的侵袭、转移及预后相关【12,13】。E-钙黏素和肌动蛋白微丝相作用，参与细胞骨架及形态的调节，细胞间的交互，对于上皮细胞形态及生理特性的维持非常重要,其表达降低通常意味着EMT的发生。和上皮细胞相比，间质细胞表达多种钙黏素，尤其是N-钙黏素的上调可加强肿瘤细胞的迁移，在转移黑素瘤中，E-钙黏素通过抑制N-钙黏素的表达参与EMT【14】。但是N-钙黏素的上调和EMT的相关性有肿瘤选择性，而间质起源的标志分子Vimentin，其表达和肿瘤的侵袭及转移呈正相关，因此，常用来鉴别肿瘤EMT【6】。参与EMT的转录因子有NF-κB、Snail、Slug及Smad，Twist等【15~19】。肿瘤微环境中的间质细胞和一些可溶性因子在肿瘤细胞上皮基质转化的诱导中起了重要作用。肿瘤细胞与其生长的局部微环境之间的交互可以诱导一些促进肿瘤细胞上皮基质转化的生长因子、细胞因子及细胞外基质蛋白分泌。其中发现许多生长因子，如EGF等，这些因子通过激活下游诸多信号通路参与EMT的诱导【9,20~23】。迄今发现在EMT中起重要作用的信号通路有：JAK通路、Wnt、Hedgehog、PI3K、ERK/MAPK、Notch、NF-κB，TGF-β/Smad等【24】。在肿瘤组织中鉴别EMT对于进一步理解肿瘤转移相关机制，确定肿瘤的治疗方案，改善肿瘤的预后有极大作用。对EMT的深入研究，有利于正确的掌控药物时间窗。目前研究显示，和增殖细胞相比，非增殖的细胞更具有转移的潜力【25】，但该类细胞对增殖抑制剂大多不敏感，因此，发生EMT的许多肿瘤对酪氨酸激酶抑制剂具有抗药性。非小细胞肺癌中小分子生长因子受体抑制剂erlotinib介导生长抑制只是改变了上皮特征基因，而不是间质特征基因【26】，因此，可见肿瘤细胞发生上皮基质转化后抗药性有所增加。另如，紫杉醇在上皮卵巢癌中的抵抗，lapatinib在乳腺癌中的药物抵抗，等【27,28】。探索经典药物联合靶向对抗EMT分子疗法，对