人脐血cd34细胞来源的树突状细胞抗肝癌实验研究-experimental study on anti-liver cancer effect of dendritic cells derived from human umbilical cord blood cd34 cells.docxVIP

对照组，肿瘤细胞接种后32天处死动物。以小鼠的肿瘤发病率、肿瘤潜伏期、肿瘤大小和生长速度为检测指标，并进行统计学分析。结果①经MiniMACS分离人脐血CD34+细胞，其比例约占脐血单个核细胞的0.5%~1%。CD34+细胞在细胞因子rhGM-CSF、rhTNF-α诱导下，细胞形态由小变大、由圆形逐渐变为不规则形；细胞分裂扩增过程中，数量逐渐增多，形成细胞集落。集落周围的细胞伸出长的树枝状突起，具有成熟DC的形态，并不断从集落脱落下来。经过肿瘤细胞裂解抗原刺激后，DC的胞质突起变得更长、更丰富。②人脐血来源的DC疫苗诱导的CTL对人肝癌细胞BEL-7402的体外杀伤活性明显强于未经DC活化的淋巴细胞（P0.01），脐血来源的CTL和外周血来源的CTL的杀伤活性相比较无明显差异（P0.05）。③DC疫苗诱导人外周血来源的CTL治疗荷瘤小鼠，肿瘤生长速度减慢，肿瘤体积明显小于未经DC致敏的淋巴细胞治疗组（P0.05）。而用DC疫苗诱导的人外周血CTL免疫小鼠，肝癌细胞攻击后，肿瘤的发病率降低（P0.05），发病潜伏期延长（P0.01），肿瘤体积减小（P0.05）。④与DC疫苗诱导的CTL治疗组比较，DC疫苗诱导的CTL免疫保护组肿瘤发病率低（P0.05），发病潜伏期延长（P0.01），免疫组肿瘤体积和重量较治疗组小（P0.05）。结论①人脐血CD34+干细胞含量相对丰富，在细胞因子rhGM-CSF、rhTNF-α诱导下能扩增并分化为成熟DC；DC受肿瘤抗原刺激后突起更长更丰富，进入充分成熟状态。②经肝癌细胞裂解抗原致敏、来源于人脐血的DC疫苗，能明显增强CTL对相应人肝癌细胞的体外杀伤效应，而且DC疫苗对脐血来源的初始型淋巴细胞和外周血来源的淋巴细胞有同样的激活作用。③人脐血来源DC疫苗诱导的CTL能在一定程度上抑制荷瘤小鼠肿瘤细胞的生长，抵御肿瘤细胞对小鼠的攻击，降低肿瘤发病率，具有相应的免疫治疗和免疫保护作用。④脐血来源的DC疫苗抗人肝癌的免疫保护作用强于其对人肝癌的免2疫治疗作用。关键词树突状细胞；肝癌细胞；脐血；SCID小鼠；人3theEffectofDCfromCordBloodCD34+CellonHumanHepatomaCellBEL-7402invitroandinvivoGraduate:SuZhongjingSupervisor:ChenHaibin(CancerPathologyLaboratory,DepartmentofHistologyandEmbryology,ShantouUniversityMedicalCollege)ABSTRACTObjectiveTopreparecancervaccineofdendriticcells(DCs)derivedfromhumancordbloodusingwholetumorlysatesandstudyitscytotoxicactivityonhumanhepatomacellsinvitroandinvivo.MethodsCD34+hematopoieticstemcellswereisolatedfromhumancordbloodmononuclearcellswithCD34+progenitorcellisolationkitbyMiniMACS(magneticactivatedcellsorting),andthenstimulatedwith100μg/mlrecombinedhumangranulocyte-macrophagecolony-stimulatingfactor(rhGM-CSF)and50U/mlrecombinedhumantumornecrosisfactor(rhTNF)-αfortwoweeks.ThedifferentiationprocessofDCwasobservedunderthephasecontrastmicroscope.AllogeneiclymphocytesfromperipheralbloodorcordbloodwereprimedintocytotoxicTlymphocytes(CTLs)byDCspulsedwithsupersonicallylysedhumanhepatomacellBEL-7402.ThecytotoxicactivityofCTLinvitrowasdetectedbylivecellcountingandNeutralreduptakeassay.ForstudytheeffectofCTLonhepatomacellinvivo,SCIDmiceweredividedintotreatmentgroupandimmunitygroup.Themic