水杨酸钠对lps刺激后人thp-1细胞的活性 糖代谢及细胞因子分泌的影响-effects of sodium salicylate on active glucose metabolism and cytokine secretion in human thp - 1 cells stimulated by lps.docxVIP
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- 2018-07-31 发布于上海
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水杨酸钠对lps刺激后人thp-1细胞的活性 糖代谢及细胞因子分泌的影响-effects of sodium salicylate on active glucose metabolism and cytokine secretion in human thp - 1 cells stimulated by lps
独创性声明本人郑重声明,本学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果的总结。尽我所知,除文中已经标明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本人将承担本声明引起的一切法律后果。学位论文作者签名:日期:年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文本论文属于保密□,在年解密后适用本授权书。不保密□(请在以上方框内打“√”)学位论文作者签名:指导教师签名:日期:年月日日期:年月日目录中文摘要1英文摘要3正文6前言6材料和方法8实验结果19讨论30参考文献32综述35附录143致谢45中文摘要水杨酸钠对LPS刺激后人THP-1细胞的活性、糖代谢及细胞因子分泌的影响硕士研究生:罗雅茹导师:梅伟华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室【目的】验证水杨酸钠是否通过激活AMPK蛋白抑制细菌脂多糖(LPS)刺激后人单核细胞THP-1的细胞活性及糖酵解,并影响炎症因子的表达。【方法】1、培养THP-1细胞,分别给予或不给不同浓度的LPS及水杨酸钠刺激THP-1细胞,培养24h后用MTT、LDH和细胞流式PI染色的方法检测细胞活性,培养8h后,用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)的方法检测细胞因子TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-10的mRNA表达水平,培养24h后用ELISA试剂盒检测细胞上清中TNF-α,IL-6,IL-10,IL-1β的含量,培养24h和48h后取细胞上清检测细胞葡萄糖消耗量和乳酸生成量及氧分压含量。2、培养THP-1细胞,分别给予或不给LPS、水杨酸钠和AMPK蛋白抑制剂compoundC处理THP-1细胞,培养0.5h后用Westernblotting的方法检测磷酸化AMPKα及AMPKα总蛋白水平。3、培养THP-1细胞,提前半小时给予AMPK抑制剂compoundC处理细胞后,再给予或不给LPS及水杨酸钠,培养8h后,用qRT-PCR的方法检测细胞因子TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-10的mRNA表达水平。【结果】1、MTT实验、LDH实验和细胞流式PI染色的方法证实5mM水杨酸钠可加剧10ug/mlLPS刺激后的THP-1细胞的死亡;水杨酸钠可使100ng/mlLPS刺激后的THP-1细胞IL-1β蛋白的分泌减少,IL-6和IL-10的mRNA表达量降低,TNF-α的mRNA表达及蛋白分泌没有变化;而用10ug/mlLPS刺激细胞时,水杨酸钠可以抑制IL-1β、IL-6和IL-10的mRNA表达及蛋白分泌,但同时促进了TNF-α的mRNA表达及蛋白分泌;水杨酸钠可以减少LPS刺激后THP-1细胞的葡萄糖消耗量和乳酸生成量。2、LPS刺激后THP-1细胞的AMPKα蛋白磷酸化水平与正常组相比没有差异,水杨酸钠刺激后THP-1细胞的AMPKα蛋白磷酸化水平比正常组高2.8倍,而LPS+水杨酸钠组与LPS组相比AMPKα蛋白磷酸化水平也升高2.8倍,LPS+水杨酸钠+compoundC组与LPS+compoundC组相比AMPKα蛋白磷酸化水平有降低的趋势,所有组AMPKα总蛋白的相对表达量没有明显变化。3、使用AMPK抑制剂compoundC后,水杨酸钠对10μg/mlLPS刺激后THP-1细胞促进TNF-αmRNA和抑制IL-10mRNA表达的作用消失,而水杨酸钠对IL-1β和IL-6的抑制作用仍存在。【结论】1、高浓度水杨酸钠可以加重大剂量LPS刺激后THP-1细胞的死亡;在小剂量LPS刺激细胞时,水杨酸钠主要通过抑制IL-1β的生成发挥抗炎作用,当使用大剂量LPS刺激细胞时,水杨酸钠既能剂量依赖性抑制促炎因子IL-1β和IL-6以及抗炎因子IL-10表达,又能促进促炎因子TNF-α表达;水杨酸钠还可以抑制LPS刺激后THP-1细胞的糖酵解过程,影响细胞的能量代谢。2、水杨酸钠可以上调LPS刺激后THP-1细胞AMPK蛋白磷酸化水平,compoundC可以部分抑制水杨酸钠对AMPK蛋白的磷酸化作用。3、水杨酸钠可以通过上调AMPK磷酸化水平影响细胞因子TNF-α和IL-10的表达,还可能通过AMPK改变了LPS刺激后细胞的糖代谢以及抑制THP-1细胞的活性。【关键词】水杨酸钠;脂多糖;单核细胞;AMPK;白细胞介素-1β;白细胞介素-6;白细胞介素-10;肿瘤坏死因子-α国家自然科学基金资助项目(No湖北省
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