膳食添加鱼油通过阻断nf-κb炎症通路减轻糖尿病大鼠周围神经痛-dietary fish oil supplementation reduces peripheral neuralgia in diabetic rats by blocking nf - κ b inflammatory pathway.docxVIP

膳食添加鱼油通过阻断NF-κB炎症通路减轻糖尿病大鼠周围神经痛中文摘要背景：糖尿病周围神经病变(diabeticperipheralneuropathy，DPN)是糖尿病(diabeticmellitus，DM)最常见的慢性并发症之一，以累及感觉神经，造成感觉缺失或痛觉过敏最为常见，也可影响运动神经和自主神经。本研究的结果显示，鱼油可减少注射链脲佐菌素(streptozotocin，STZ)引起糖尿病的大鼠背根神经节(dorsalrootganglion，DRG)中的炎性因子，对糖尿病造成的触诱发痛和痛觉过敏也具有一定治疗效果。同行为学实验的结果相符，与未经治疗的糖尿病大鼠相比，鱼油干预可降低糖尿病大鼠DRG中NF-KB等炎性细胞因子的表达，同时促进了糖尿病大鼠DRG中AKt磷酸化。这些结果表明，在糖尿病大鼠饮食中添加鱼油抑制触诱发痛和痛觉过敏的机制可能与其通过调节NF-KB和AKt发挥抗炎作用有关。鱼油可能可以作为一种有效的预防和治疗糖尿病并发症的辅助品。目的：糖尿病是以高血糖症状，慢性炎症和胰岛素抵抗为特征的代谢性疾病[l，2]，DPN的发病机制也可能与其相关。糖尿病周围神经痛(Painfuldiabeticneuropathy，PDN)是糖尿病一种极为常见的神经系统并发症，可能导致触诱发痛和热痛觉过敏，而糖尿病患者产生这种异常的伤害感受的深层机制尚不清楚。既往有报道称核转录因子KB(nuclearfactor-K-genebinding，NF-KB)的激活可增强肿瘤坏死因子α(tumornecrosisfactorα，TNF-α)及白细胞介素l-?(interleukin-l?，IL-l?)的转录，这两种细胞因子又有活化NF-KB的作用，炎症信号将经这种正反馈作用得到放大[3]。炎症细胞因子在周围神经痛的发生和进展过程中扮演着重要角色[4，5]，有研究表示磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol3-kinase，PI3K)信号通路可增加糖原合成激酶3?(glycogensynthasekinase-3?，GSK-3?)活性[6]，参与调控胰岛素信号通路及NF-KB通路[7]。n-3多不饱和脂肪酸(n-3polyunsaturatedfattyacids，n-3PUFA)在神经组织中有抗炎作用[8-ll]。另外，有研究报道n-3PUFA对多种原因造成的疼痛均有改善作用[l2，l3]。在大鼠背根节神经元中，细胞外二十二碳六烯酸(docosahexaenoicacid，DHA)和二十碳五烯酸(eicosapentaenoicacid，EPA)可抑制钠电流，降低神经元兴奋性[l4]。虽然众多研究结果都提示n-3PUFA可改善疼痛，但其对糖尿病大鼠DRG的作用仍属未知。因此，本研究的目的是明确补充富含n-3PUFA的鱼油(Fishoil，FO)是否能够减轻糖尿病大鼠的触诱发痛和热痛觉过敏。方法：体重200-230g雄性成年SD大鼠共l00只，取40只完全随机分为4组。对照组：皮下注射生理盐水，喂食标准饲料；对照+鱼油组：皮下注射生理盐水，喂食添加4%鱼油的标准饲料；糖尿病组：皮下注射STZ，喂食标准饲料；糖尿病+鱼油组：喂食添加4%鱼油的标准饲料。取60只大鼠随机分为5组，对照组：皮下注射生理盐水，鞘内注射生理盐水；对照+PDTC组：皮下注射生理盐水，鞘内注射PDTC；糖尿病组：皮下注射STZ，鞘内注射生理盐水；糖尿病+PDTC组：皮下注射STZ，鞘内注射PDTC(20只，分别于注射STZ第l天和第l4天进行鞘内注射)；糖尿病+空载体组：皮下注射STZ，鞘内注射含3%DMSO的生理盐水。所注射STZ剂量为60mg/kg，PDTC为50mM，鱼油中DHA/EPA含量为30%。实验周期为5周，每7天称重一次(9:00-l0:00)，注射后第三天测量随机血糖l6.7mmol/L即为建模成功。注射前l0天开始，每3天进行行为学实验，测定大鼠热痛敏和机械痛敏，共进行l4次。实验第5周末处死动物，取L4、L5节段双侧背根节检测IKK?、IKBα、p-AKt、AKt、NF-KB、IR?、IRS-l、p-GSK-3?、GSK-3?、TNF-α和CXCLl及TNF-α和CXCLl的mRNA水平。结果：与对照组相比，皮下注射STZ可引起糖尿病组及糖尿病+鱼油组大鼠血糖明显升高(P0.0l)，并伴有体重下降(P0.0l)，而在饲料中添加鱼油并不能改善糖尿病大鼠高血糖和体重减轻的情况(P0.05)。行为学实验结果显示，注射STZ后，大鼠发生了机械触诱发痛和热痛觉过敏；而摄入鱼油可使糖尿病大鼠痛觉过敏的情况得到明显改善(P0.0l)。糖尿病组糖尿病大鼠背根节中，TNF-α和CXCLl的蛋白及mRNA表达量与对照组相比明显上升(P0.05)