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实验十二 微丝地观察(荧光探针标记)
实验十二 微丝的观察(荧光探针标记);一 实验目的;二 实验原理;三 实验步骤;三 实验步骤;注意事项:
1 荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
2 Phalloidin 有一定毒性(LD50 为2 mg/kg),1ml Actin-Tracker Green中的phalloidin少于0.01mg,使用时请注意适当防护。
3为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
4 固各步洗细胞要轻,勿使细胞脱落。
5 用1%Triton X—100 抽提杂蛋白要作预实验,抽提时间长将破坏细胞结构,抽提时间短背景干扰大。
6 鬼笔环肽标记微丝,染色时间勿太长,否则背景发红。在没有固定液3.7%甲醛—PEMD的情况下,也可以用-20℃冷甲醇代替,但是效果较差。
7 细胞充分贴壁铺展时应力纤维较多,形态挺直。反之,细胞收缩变圆,应力纤维弯曲,甚至部分解聚消失而显得稀少。
8每步洗涤要充分,并吸去水分(但也不要干透),以免稀释下一步的???体或试剂,这样才能得到清晰的荧光图像。
; 四 作业;五 预期结果(共聚焦效果图)
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