山羊骨骼肌表达载体pimau-egfp的构建-construction of goat skeletal muscle expression vector pimau - egfp.docxVIP

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2018-07-30 发布于上海
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山羊骨骼肌表达载体pimau-egfp的构建-construction of goat skeletal muscle expression vector pimau - egfp.docx

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山羊骨骼肌表达载体pimau-egfp的构建-construction of goat skeletal muscle expression vector pimau - egfp

3.3.1 pGEM-T 载体与 5’-侧翼核苷酸序列的连接 29 3.3.2 pGEM+5’质粒的提取 30 3.3.3 pGEM+5’载体与 3’-侧翼核苷酸序列的连接 31 3.3.4 质粒 pGEM+5’+3’的提取及酶切鉴定 31 3.4 载体 pGEM+5’+3’+M-EGFP 的构建 33 3.4.1 载体 pGEM+5’+3’与 M-EGFP 的连接 33 3.4.2 重组 pGEM+5’+3’+M-EGFP 的质粒提取 35 3.4.3 重组质粒 pGEM+5’+3’+M-EGFP 的酶切鉴定 35 3.5 载体 pIMAU-EGFP 的细胞验证 36 3.5.1 骨骼肌细胞的培养........................................... 36 3.5.2 载体 pIMAU-EGFP 的转染结果 37 4 讨论 ............................................................ 38 5 结论 ............................................................ 40 致谢 ........................................................... 41 参考文献 ..................................................... 42 作者简介 ..................................................... 46 插插图和附表清单 1. 图 1 肌节结构 ............................................................ 2 2. 图 2 启动子的结构 ........................................................ 4 3．图 3 GFP 突变体 5 4．图 4 基于钙粘蛋白的细胞连接的结构蛋白的主要相互作用........................ 7 5．图 5 M-EGFP 基因片段合成过程 19 6．图 6 5’-侧翼区和 3’-侧翼区的 PCR 扩增和纯化电泳图 26 7．图 7 EGFP 扩增电泳图 27 8．图 8 M-EGFP 结构图 27 9．图 9 M-EGFP 扩增电泳图 29 10．图 10 EGFP 和 M-EGFP 的纯化电泳图 39 11．图 11 5’-侧翼区序列菌落 PCR 电泳图 30 12．图 12 pGEM+5’质粒提取电泳图 30 13．图 13 3’-侧翼区序列菌落 PCR 电泳图 31 14．图 14 pGEM+5’质粒提取及酶切鉴定电泳图 31 15．图 15 pGEM+5’+3’载体的构建流程图 32 16．图 16 5’-侧翼区序列、3’-侧翼区序列和 M-EGFP 的菌落 PCR 电泳图 33 17．图 17 pGEM+5’+3’+M-EGFP 载体的构建流程图 34 18．图 18 pGEM+5’+3’+M-EGFP 质粒提取电泳图 35 19．图 19 pGEM+5’+3’+M-EGFP 质粒酶切鉴定电泳图 35 20．图 20 pGEM+5’+3’+M-EGFP 质粒双酶切鉴定电泳图 36 21．图 21 骨骼肌细胞 ........................................................ 37 22．图 22 pIMAU-EGFP 转染骨骼肌细胞图 37 缩略语表缩略语表 AMP Ampicillin 青霉素 Bp Base pair 碱基对 dNTP deoxy-ribonucleoside triphosphate) 三磷酸脱氧核糖核苷 PCR Polymerase chain reaction) 聚合酶链式反应 EGFP Enhancerd green fluorescent protein 绿色荧光蛋白 FBS Fetal Bovine Serum 胎牛血清 EDTA ethylenediamine tetra-eetate 乙二胺四乙酸盐 DMSO Dimethyl sulfoxide 二甲基亚砜 PBS Phosphate Buffer Saline 磷酸盐缓冲液 FBS Fetal bovine serum 胎牛血清 PCR Polymerase chain reaction 聚合酶链式反应 BSA Bovine serum albumi