升温对人胃癌紫杉醇耐药细胞株化疗敏感性影响-effect of temperature rise on chemosensitivity of paclitaxel-resistant cell line of human gastric cancer.docxVIP

升温对人胃癌紫杉醇耐药细胞株化疗敏感性的影响中文摘要升温对人胃癌紫杉醇耐药细胞株化疗敏感性的影响中文摘要目的：探讨紫杉醇（Paclitaxel，TAX）化疗联合热疗对胃癌TAX敏感细胞株MKN-45及TAX耐药细胞株MKN-45/TAX的影响，探讨靶向多药耐药基因1(multiple-drugresistancegene1,MDR1)的siRNA对MKN-45/TAX多药耐药性的逆转作用，为临床应用热化疗提供理论依据。方法：1、通过浓度梯度递增法建立胃癌TAX耐药细胞株，命名为MKN-45/TAX。2、采用细胞增殖试剂盒（cellcountingkit-8，CCK-8）法检测不同温度和不同TAX浓度作用下2种细胞的增殖抑制率。3、采用反转录–聚合酶链反应（reversetranscription-PCR，RT-PCR）法、蛋白质印迹（Westernblotting）法、免疫细胞化学染法检测在不同温度作用下,MKN-45/TAX和MKN-45细胞株的体外药物敏感性,多药耐药相关基因MDR1在mRNA和蛋白水平上的表达。4、采用RT-PCR检测经靶向siRNA处理前后MDR1mRNA表达水平的变化；Westernblot法检测经靶向siRNA处理前后P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的变化。5、构建介孔二氧化硅纳米颗粒负载siRNA靶向沉默MDR1基因；RT-PCR法、Westernblot法检测沉默效果。结果：l、成功建立MKN-45/TAX。2、MDR1在MKN-45/TAX中高表达而在MKN-45中低表达。3、在MKN-45及MKN-45/TAX中，随着TAX浓度的增加对化疗药物增殖抑制率增加；42℃时MKN-45/TAX对TAX化疗药物的增殖抑制率降低，而MKN-45则升高。4、转染siRNA后MDR1mRNA和P-gp的表达水平均下降。5、介孔二氧化硅纳米颗粒负载siRNA靶向沉默MDR1基因较单纯siRNA沉默效果好。结论：1、热疗本身具有杀灭肿瘤细胞的作用，联合TAX化疗可增强MKN-45/TAX对化疗的耐药性，而增强MKN-45对化疗的敏感性，其机制与MDR1表达有关。2、靶向MDRl的siRNA可逆转MKN-45/TAX细胞MDRl介导的多药耐药。3、介孔二氧化硅纳米颗粒负载siRNA靶向沉默MDR1基因可增加siRNA沉默效率。关键词：热疗；MKN-45；MKN-45/TAX；MDR1；siRNA；耐药作者：李芳指导老师：张学利英文摘要升温对人胃癌紫杉醇耐药细胞株化疗敏感性的影响EffectsofPaclitaxelChemotherapyCombinedwithHyperthermiaonPaclitaxel-sensitiveandPaclitaxel-resistantGastricCancerCellLineAbstractObjective:Toobservetheeffectofpaclitaxel(TAX)chemotherapycombinedwithhyperthermiaonTAX-sensitiveandTAX-resistantgastriccancercelllinesMKN-45andMKN-45/TAX.TofurtherinvestigatepossiblemechanismofitsroleasreversingthedrugresistanceofmultidrugresistancehumangastricadenocarcinomacelllineMKN-45/TAX,andhowtoimprovethereversaleffectofthesiRNA.Itwillprovidetheoryevidenceinclinichyperthermia.Methods:1.EstablishaTAX-resistantvariantofhumangastriccancercellslineMKN-45bycultivatingwithTAX,namedMKN-45/TAX.2.CCK-8testwasusedtodetecttheinhibitionrateofbothcelllinesproliferationunderdifferenttemperaturesanddifferentdrugs.3.ExperimentalmethodsincludingRT-PCR,Western-blotmethods,immuno-cyto-histochemicalstaining,wereemployedtodetecttheeffectofdifferenttemperaturesanddifferentdrugsontheinvitrodrugsensitiv