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实习十 梅毒实验室诊断技术 实验(三) 一、实验目的 通过对梅毒实验室检测方法的 学习，了解和掌握某些传染病 的快速筛查方法在流行病学调 查中应用的重要作用。 二、实验原理 根据《中华人民共和国传染病防治法》及《中华人民共和国传染病防治法实施办法》特制定梅毒诊断标准及处理原则 GB 15974—1995 血浆反应素环状卡片TRUST试验 -（定量法） 此试验是VDRL试验的一种改良方法。 优点是试剂及对照血清已标准化，费 用低。此法操作简单，肉眼即可读出 结果。 螺旋体体内的心磷脂、卵磷脂及胆固醇具有抗原性，可诱发机体产生（心磷脂或卵磷脂）反应素，该反应素可与从动物中提取的心磷脂（VDRL）抗原在体外发生抗原抗体反应。 将VDRL抗原吸附于活性炭颗粒表面，当遇到梅毒血清抗体(IgG、IgM)时，在物理的摇动、碰撞下，微粒便相互粘附而形成肉眼可见的黑色凝集颗粒，其结果便是阳性（+）。 实验原理 本试验适用于一期梅毒(阳性率75％～ 85％)及二期梅毒(阳性率100％)诊断。也适用于疗效观察，判定复发及再感染的监测，由于操作简便，出结果快，亦适用于普查、婚检、产前检查及其它健康检查等。 三、试剂与器材 1、试剂盒：梅毒快速血浆反应素诊断试剂 上海科华生物技术有限公司 2、0.85％生理盐水； 3、采集静脉血2.0ml,分离血清或 血浆备用； 4、加样器（100ul)、吸头（100ul) 。 四、操作步骤 1.A行除第1孔外，所有孔中均加入50μl生理盐水； 2.在第1孔、第2孔中分别加入50μl待检样本； 3.用加样器在第2孔混合后，吸出50μl至第3孔内，再混匀，依次作倍比稀释至第6孔，混匀后弃去50μl； 4.第7孔用作阳性对照，加入50μl阳性血清； 5.在板中每一孔加入50μl的甲苯胺红抗原悬液， 注意如从高浓度至低浓度加入，应更换吸头； 6.按每分钟100转摇动8-10分钟，置室温，肉眼可 观察结果 。 四.操作步骤 孔 号 1 2 3 4 5 6 7 8 稀释倍数 原倍 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 阳性K 阴性K 生理盐水(ul) - 50.0 50.0 50.0 50.0 50.0 - - 样 品(ul) 50.0 50.0 50.0 50.0 50.0 50.0弃50.0 - - 阳性血清(ul) - - - - - - 50.0 - 阴性血清(ul) - - - - - - - 50.0 抗原悬液(ul) 50.0 50.0 50.0 50.0 50.0 50.0 50.0 50.0 按每分钟100转速度，摇动卡片8-10分钟，置室温，肉眼观察结果. 五、结果判定 以出现凝集颗粒判为阳性，当凝集达到100%时可判++++，当凝集达到75%时可判+++,当凝集达到50%时可判++,当凝集达到25%时可判+,当凝集25%或无凝集现象时可判±或-。 活动性梅毒抗体滴度在≥1:8以上才有诊断意义。 六、注意事项 本试验在23℃-29℃环境下进行。 TRUST试剂使用前应充分摇匀。 此方法主要用于梅毒的筛选和治疗效 果的观察，初诊病人抗体滴度如果1:8 时应同时作特异性抗体试验证实或考虑 其它疾病。 注意事项 作为治疗效果观察时，恢复期病人第一年内每三个月复查一次，以后每半年复查一次观察抗体，随访2-3年。 四、实习报告 1、实验目的; 2、实验原理; 3、试剂与器材; 4、实验方法; 5、结果判定; 6、结果讨论。 2005.12.12.