流感病毒标本采集运输分离检测及注意事项ppt课件.pptVIP

流感病毒标本采集、运输、病毒分离检测及注意事项;标本种类 临床标本 鼻拭子、咽拭子、鼻咽吸取物、漱口液等 血清标本 病人的急性期和恢复期血清双份血清;临床样本的选择 采样对象：流感样病例（没有服用过抗病毒药物 ）、人禽流感待查病例 流感样病例:发热（体温≥38℃），伴咳嗽或咽痛之一者，而缺乏其它的实验室确定诊断依据 采集时间：病人发病后的头三天;采样液的要求 采样液应包含有一定量的蛋白质和抗菌素 常用的采样液有：PH 7.4-7.6的Hank’s液，Eagel’s细胞液 采集后应立即放入适当的采样液中低温保存 ; 抗生素名称;临床标本的采集法 鼻拭子 咽拭子 鼻咽吸取物 漱口液 若采集的是鼻咽拭子，同一时间采集的标本可放入同一管内 注意：采集禽流感疑似病人标本 最好是下呼吸道吸取物 ;临床样本收集的注意事项 操作要细心，严防标本间交叉污染，要做好自我保护 采集禽流感疑似病人的标本，最好采集下呼吸道吸取物 采集标本要有一定力度 标本采集后应迅速至于冰上或者4 ℃以下保存，因为流感病毒对热很敏感 标本管标识明确：医院名称，标本号，患者姓名，性别， 采样日期 标本采集后尽量在24小时内送到实验室进行病毒分离。24小时内未能进行病毒分离的标本应放-70 ℃或以下 ;血清学标本注意事项 血清学最好采集急性期和恢复期的双份血清 采集空腹血;标本必须放在大小适合的带螺旋盖内有橡胶圈的塑料管里，拧紧； 将密闭后的标本放入大小适合的塑料袋内密封；每袋装一份标本； 在采样管上用油性记号笔做好标记用塑料袋密封。同时填写“流感/人禽流感监测病例标本原始登记表”，用另一塑料袋密封； 将装标本的密封袋放入专用运输箱内，放入冰排，然后以柔软物质填充，内衬具吸水和缓冲能力的材料。同一患者2份以上的密封标本，可以放在同一个塑料袋内再次做密封。所有容器必须有生物危险标识。 ; 流感病毒临床标本的运送要求 新鲜的临床采集标本 应在4℃条件下24小时内运送至全国流感监测网络实验室; 未能24小时内送至实验室??，应置-70℃或以下保存 冻存的临床采集标本 应在冻存的条件下，低温送至实验室 ; 含聚丙烯纤维的拭子的采集标本:先将含聚丙烯纤维的拭子在管壁反复挤压后取出 鼻腔或咽部洗液的标本:充分振荡标本管，将粘液打碎。置4℃待其自然沉淀5～10分钟，取上清5 ml。上清液可直接接种或低温保存 ; 临床标本处理后，将原始标本分为三份，一份（40％）用于鸡胚接种，一份（30％）用于MDCK细胞接种，一份（30％）保存待复核用。对于病毒分离阳性的标本－70℃保存6个月 ;流感病毒的分离; ;标本接种注意 最好24小时内进行病毒分离 病毒分离标本实验室的保存条件 24小时内进行病毒分离，4℃保存 24 ～ 48小时内不能进行病毒分离的－70℃或以下保存 ; 常采用鸡胚和MDCK细胞分离方法 流感病毒分离：生物安全二级实验室 禽流感病毒分离：生物安全三级实验室;病毒分离注意事项; 不同胰酶TCID50检测结果 ;MDCK细胞敏感性试验结果;用照蛋灯检视鸡胚，判断鸡胚状态 血管：活胚血管清晰；死胚模糊，成淤血带或淤血块 胎动：活胚有明显的自然运动，死胚无胎动 绒毛尿囊膜发育界限：密布血管的绒毛尿囊膜与鸡胚胎的另一面形成明显的界限 标记出鸡胚的气室与尿囊的界限、胚胎头部 的位置 如果鸡胚是死胚、没有受精、有裂痕、发育 不全、或表面有好多渗水孔，应弃掉;流感病毒操作要求生物安全规程 禁止在同一实验室，同一时间处理接种未知临床标本和已知标准病毒 禁止在同一实验室，同一时间处理接种采自不同动物的标本 动物标本（如猪、禽等）必须与人的标本分别保存;流感病毒鉴定;鉴定方法 血清学方法 红细胞凝集及凝集抑制试验 神经氨酸酶活性及抑制试验 其它方法 核酸检测 快速检测试剂盒;红细胞凝集和红细胞凝集抑制试验;使用的试剂可靠无误 红细胞悬液浓度是否合适 处理后的血清有无残余非特异性凝集素 选用标准抗血清是否准确 读取HA试验的结果是否正确 4个血凝单位是否准确 红细胞阴性对照 待鉴定病毒确保没有被细菌污染 稀释血清、病毒、红细胞悬液加入量准确;流感病毒核酸检测;流感病毒实验室检测方法比较;流感病毒的核酸检测方法;RT-PCR 组成成分;;;灵敏度高 皮克(pg=10-12g)量级扩增到微克(ug=10-6g)水平 能从100万个细胞中检出一个靶细胞 病毒检测的灵敏度可达3个RFU 细菌检测的最小检出率为3个细菌 简便、快速