《诊断酶学》课件.ppt

第五章 诊断酶学;教学内容;一、酶的概念与特征;（一）酶的组成、结构与功能 1.酶的本质和特征 ⑴ 酶的化学本质：绝大部分的酶是蛋白质，有些酶是核酸和酶蛋白 组成的复合体，极少数酶是核酸。 ⑵ 酶除了具有蛋白质的理化性质、一般催化剂的共同性质外，还具 有极高的催化效率、高度的特异性（specificity）及催化作用的可调节性等特点。 ⑶ 由酶所催化的反应称为酶促反应。 酶促反应过程中的几个概念： 酶活性（activity） ；底物（substrate）； 产物（product）； 激活剂（activator）；抑制剂（inhibitor） ⑷ 核酶（ribozyme）：具有催化作用的核糖核酸。;2.酶的结构和功能 ⑴ 酶和一般蛋白质一样，具有一、二、三乃至四级结构。 单体酶（monomeric enzyme） 寡聚酶（oligomeric enzyme） 多酶体系（multienzyme） 多功能酶或串联酶（tandem enzyme） ⑵ 单纯酶（simple enzyme）：仅由氨基酸残基构成的酶。 结合酶（conjugated enzyme）：除含蛋白质外，还含有非蛋白部分（金属离子或小分子有机化合物），前者称为酶蛋白，后者称为辅因子。;;;;二、同工酶的概念与特征;酶;三、工具酶;;;;; ;一、酶活性测定;;;2.间接法 采用酶偶联反应是间接法测定酶活性的主要技术特点。 (1)最简单的酶偶联反应（单底物反应且只有一个工具酶）模式为： Ex：被测定酶 C：被检测物质 Ei：指示酶 Ex催化的反应称为始发反应，产生被检测物质产物C的反应称为指示反应。 (2)如果一些酶促反应找不到合适的指示酶与其直接偶联，此时往往还可在始发反应和指示反应之间加入另一种酶，将二者连接起来，此反应称为辅助反应。模式为： 一般习惯将最后一个酶称指示酶Ei，其他外加的酶称为辅助酶（Ea）。 ;(3)偶联反应中存在几个时相： ①预孵育期：反应一开始只存在底物A，不存在指示酶的反应。 ②延滞期：加入底物启动反应，在启动后的一段短时间内，产物B开始出现并逐渐增加，但仍处于较低水平，指示酶反应速度也较低，不能代表测定酶的反应速率Vx 。 ③稳态期：产物B增加到一定程度时，Ex和Ei催化的反应速率相同，达到了稳态期。???阶段特定波长处（如340nm）吸光度才会有明显的线性变化。 ;(4)指示酶的选择 ① Vx/(Km)x=Vi/(Km)i Vi：指示酶的用量 Vx：测定酶的测定上限 (Km)x：分别是测定酶 (Km)i：指示酶的米氏常数 ②米-曼氏方程 在酶偶联反应中，指示酶催化反应速率Vi的计算公式为： 式中Vx为测定酶的测定上限，(Km)i为指示酶的米氏常数，P为中间产物浓度。 ;;(三)干扰因素 1. 其他酶和物质的干扰 2. 酶的污染 3. 非酶反应 4. 分析容器的污染 5. 沉淀形成 ;;;;;酶;;2.酶活性浓度单位 临床上测定的不是酶的绝对量而是浓度。酶活性浓度以每单位体积所含的酶活性单位数表示。 （1）表示方法 目前在临床化学中，各国学者几乎都习惯用U/L来表示体液中酶催化浓度。1U/L=16.67nkatal/L。 （2）酶活性浓度单位的计算 用连续监测法进行酶活性测定时，不需作标准管或标准曲线，根据摩尔吸光系数很容易进行酶活性浓度的计算。摩尔吸光系数（ε）的定义为：在特定条件下，一定波长的光，光径为1.00cm时，通过所含吸光物质的浓度为1.00 mol/L时的吸光度。 如用连续监测法测定在线性范围内每分钟吸光度的变化（?A/min），以U/L表示酶活性浓度时，则可按下式进行计算： 式中：V—反应体系体积（ml） ε—摩尔吸光系数（cm2·mol-1） v—样品量（ml） L —比色杯光径（cm） △A—吸光度变化 106 —将mol换算成μmol ;;临床常用血清酶的测定方法与参考区间（37℃）;;2.系数K值的类型与计算 系数K值只能供用户通过计算式及求实测K值时参考，不能直接用于酶活性浓度的计算。 ;;2.酶活性浓度测定的参考系统 IFCC 于1998年决定建立包括下列要素的测定酶催化浓度的参考系统： ①参考测定方法，以现有的IFCC 30℃的参