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精子的低温贮藏：是否存在交叉污 染的潜在危险？ Gary N. Clarke Andrology Department, The Royal Womens Hospital, Carlton, Victoria 3053, Australia 编译：北京博益伟业仪器有限公司 虞海燕北京100085 sales@bio- 精子的低温保存一直被人们所关注，在很多科学刊物或医疗刊物上刊登了大 量的文章来研究此课题。目前，体外人工受精的受孕率已经可达到自然受孕率的 水平。然而，在大部分文献中，极少有人注意过在精子库保存过程中的微生物交 叉污染现象。值得欣慰的是，很多精子银行的负责人逐渐意识到了这一严重现象， 针对此问题，他们制定了一系列解决方案。方案之一就是在进行低温储存精子之 前，需要从众多精子提供者中筛选掉患有HIV病毒、乙肝、丙肝和梅毒的患者。 另一个方案是，在把健康合格的精子存入精子库之前，而又尚未得知上述的筛选 结果的情况下，需要把精子暂时存放在隔离罐中，通过筛选后，最后才把健康合 格的精子样本转移到特制的储存罐中。但是这两种方案都有缺点，即无法检测到 HIV病毒的潜伏期，并且此种筛选程序无法函盖所有的病原体。因此，我们迫切 需要第三种方案来解决这些问题，以阻止其发生或使其可能性降到最低。 在使用液氮保存生物样品的过程中，可能出现交叉污染和继发感染现象，这 在以前就被证实过。核苷酸序列分析得知，在保存骨髓细胞的过程中，出现了乙 肝病毒的交叉感染现象。其他病毒也被发现可存活于液氮中，包括水泡口炎病毒、 单纯性疱疹病毒、腺病毒和乳头瘤病毒。这也是液氮中存在微生物污染现象的证 据之一，这些微生物包括大部分细菌和真菌。在 Fountain的实验室中，有一个 液氮罐严重感染了一种曲霉菌，这是一类潜在病原体。他们报道，解冻的骨髓细 胞样本中有1-2%污染了此种曲霉菌，这极有可能是在保存过程中通过液氮的交 叉污染而发生的。因此，毫无疑问，包括乙肝病毒在内的很多微生物能够直接暴 露于液氮中并存活下来，在一定条件下导致了交叉污染。在有力证实了液氮中也 存在微生物污染或交叉污染的情况下，我们就必须严肃对待精子低温贮藏中的污 染或交叉污染现象。 传统的精子保存方案并不涉及无菌操作的问题。尤其在填充麦管时或过量填 充引起麦管胀破时，都可能污染液氮。不正确密封麦管也可能吸收进被污染的液 氮，从而导致各精子样本的交叉污染。此外，使用聚乙烯醇粉末密封容器时还会 引起额外的交叉污染，因为聚乙烯醇粉末可引起细菌的大量繁殖并最终进入另一 个麦管内部。使用冻存管保存精子时，如果直接接触液氮，也会吸进液氮引起污 染，因为冻存管的盖子在低温下是无法达到100%密封的。一个丹麦的生产厂家 极力宣称，给冻存管套上一个叫做Cryoflex的外壳可以提供足够的密封性，并 且可以将冻存管直接投入液氮中保存。本实验室的近期研究表明，在液氮中浸泡 3小时后，45%没有O型圈的冻存管和85%带有O型圈的冻存管在都吸进了液氮。 与此形成鲜明对比的是，冻存管在气态液氮中贮存16-24小时后，在冻存管内部 仍然不存在液氮。在某些情况下，冻存管吸进液相液氮的量居然能达到1ml！在 样品长时间贮存和正确解冻之后，任何微生物都能够随着液氮的吸进与精子接 触，并在液氮挥发后仍然停留在精子细胞表面。当临床应用这些精子样本进行人 工受精时，就可能导致交叉污染，某些疾病如乙肝只需微量的病毒就可引发感染。 由微生物引起液氮污染和冻存管吸进液氮的现象，使低温保存的精子在临床 应用时出现不可避免的交叉污染问题。在临床医学的其他领域中，交叉污染是一 个很严重的问题，必须采取相应措施使污染程度降到最低。幸运的是，确实有不 少细节和措施可用来改进低温保存条件，在保存精子样本时可以使交叉污染的潜 在危险降到最低。 麦管或冻存管的封闭 毫无疑问，足够的密封性是至关重要的。通过加热麦管的两端可达到封闭效 果，或使用PVA粉也可以密封住麦管。通过内部棉塞吸取精子冻存液，使其接触 并移到内棉塞和外棉塞之间的PVA粉中，从而达到封闭效果。在另一端需要留一 个约1cm的空隙，避免冷冻时胀破，将麦管端部浸泡在水中几分钟使其变硬。法 国一公司发明了一种新的麦管封闭系统（CBS），由防碎的离子交联聚合物树脂 做成，样本歧管可防止麦管和精子相互接触，同时可在两端进行加