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第二章 生理生化试验 ;一、生理生化试验的概念及其类型;（三） 生理生化试验的类型;（四）生理生化试验的方法;（五）生理生化试验的注意事项; （一）过氧化氢酶及过氧化物酶试验原理 1、2H2O2 过氧化氢酶 2H2O+O2 阳性：气体产生 2、过氧化物酶： RH2+H2O2 过氧化物酶 R+2H2O 阳性：细菌变为黑褐色； 阴性： 不变色。;（二）细胞色素氧化酶试验原理 细胞色素C 细胞色素氧化酶 氧化型细胞色素C +对苯二胺 + ? --奈酚 靛酚兰（蓝色） 阳性： 2分钟内生成蓝色为阳性 阴性：无变化。 ; 阳性： 不抑菌， 变混浊 阴性：抑菌 ;（四）硝酸盐还原试验原理 KNO3 还原酶 KNO2 KNO2+对氨基苯磺酸+ ? -萘胺 红色化合物 （立刻或数分钟内） （五）糖发酵试验 分解糖产酸，PH值下降，使培 养基的酸碱指示剂发生变化。 阳性：产酸产气;（六）氧化发酵试验（O/F试验） 有些微生物分解葡萄糖必须有氧参加，此种细菌称为氧化型； 有些细菌有氧无氧均可分解葡萄糖，称发酵型； 有些细菌任何条件都不能分解葡萄糖，称产碱型。 ;（七）甲基红（MR）试验和V-P试验 1、MR试验原理： 一些细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸可被进一步分解为甲酸、乙酸、乳酸和琥珀酸而使培养基的PH值下降到4.5以下，加入甲基红指示剂出现红色反应 2、V-P试验原理 一些细菌分解葡萄糖为丙酮酸，进一步脱羧产生乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇在碱性溶液中被空气中的氧氧化成二乙酰丁二酮，进而与培养基内蛋白胨中所含的精氨酸的胍基发生反应生成红色化合物。（试验结果同MR试验） ;（八 ）柠檬酸盐（枸橼酸盐）试验 一些微生物可以以铵盐作为唯一的氮源，以柠檬酸盐作为唯一的碳源，在柠檬酸盐培养基上生长，分解柠檬酸盐生成碳酸盐，使培养基变成碱性，酸碱指示剂变色。 （九）丙二酸钠试验 一些微生物可以以丙二酸钠作为唯一碳源，分解丙二酸钠生成碳酸钠，使培养基变成碱性，酸碱指示剂变色。 ;（十）马尿酸盐试验 一些细菌可以水解马尿酸生成苯甲酸和甘氨酸，苯甲酸和Fe3+反应生成有色的苯甲酸盐沉淀。 （十一）葡萄糖铵试验 有些细菌可利用铵盐作为唯一氮源，并分解葡萄糖产酸，酸碱指示剂变色，培养基变黄;（十二）明胶液化试验 一些细菌可产生胞外酶，使明胶蛋白分解为氨基酸,而失去明胶的凝固能力。 （十三）苯丙氨酸脱氨酶试验 一些细菌有苯丙氨酸脱氨酶，可以脱氨 生成苯丙酮酸，其与FeCl3反应产生绿色 。;（十四）氨基酸脱羧酶试验 一些细菌可以产生氨基酸脱羧酶使氨基酸脱羧， 产生胺类物质，使培养基变碱，酸碱指示剂变色。 （十五）尿素试验 一些细菌可以产生尿素酶，使尿素分解产生大量的氨，使培养基变碱，培养基指示剂变色。;（十六）靛基质试验（吲哚试验） 一些细菌可以分解蛋白胨的色氨酸，产生靛基质，靛基质可与对二甲氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚而成红色。 （十七 ）ONPG试验（ 检测?-半乳糖苷酶） 邻硝基酚--?--D半乳糖苷 ?-半乳糖苷酶 邻硝基酚+ ?--D半乳糖 ;（十八）淀粉酶试验 一些细菌可产生淀粉酶将淀粉分解为双糖或单糖，加入碘不变色。 （十九）卵磷脂酶试验 一些细菌产生卵磷脂酶，可以分解卵磷脂产生甘油脂和水溶性的磷酸胆碱，在菌落周围形成一个乳白色的沉淀或浑浊带。;（十九）脱氢酶试验 微生物有脱氢酶，可使氯化三苯四氮唑（TTC)还原，由无色变为红色。 （二十）硫化氢试验 一些微生物分解含硫氨基酸（胱氨酸或半胱氨酸），产生硫化氢硫化氢与二价铁盐或铅盐生成黑色沉淀，使培养基变黑。 ;;（二十二）三糖铁试验 1、培养基主要成分： 牛肉膏、蛋白胨（氮源） 三糖：葡萄糖0.1%、乳糖1%、蔗糖1% 硫酸亚铁 琼脂 培养基摆成高层斜面 pH值调到7.4