实验六质粒dna的制备ppt课件 .pptVIP

实验六 碱变性法小量制备质粒DNA;一．实验目的;二．实验背景;The constructed E. coli plasmid pBR322.;;Relaxed circle;质粒类型;质粒的应用;;;分离质粒DNA方法;差速离心（differential centrifugation）是利用不同离心速度产生的不同离心力，将沉降系数不同的各种亚细胞组分和各种颗粒分开。 用于分离大小、形状显著不同的组分，根据颗粒沉降速度不同得以分离. 特点： （1）介质密度均一； （2）速度由低向高，逐级离心。 沉降顺序：核——线粒体——溶酶体与过氧化物酶体——内质网与高尔基体——核蛋白体。 可将大小相差悬殊的细胞器初步分离，常需进一步通过密度梯度离心再行分离纯化。 ; dx 2r2 (ρp-ρm)V= = . ω2 X dt 9 η d2 (ρp-ρm) = . ω2 X 18ηr： 球形粒子的半径 d：球形粒子的直径η：流体介质的粘度数 ρp??粒子的密度ρm：介质的密度??;差速离心;三、实验原理碱变性法基本原理;当以pH4.8的NaAc/KAc高盐缓冲液去调节其pH值至中性时，变性的质粒DNA又恢复原来的构型，保存在溶液中，而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构， 通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质－SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。而质粒DNA仍为可溶状态留在上清中。;四、操作步骤;;思考题;OC L CCC;