LT-B 转基因烟草植株的建立.PDF

第2 5 卷第5 期 西 安 交 通 大 学 学 报 （医 学 版 ） ol 25 o 5 2 0 0 4 年10 月 Journal of Xian Jiaotong University（Medical Sciences ） ct 2004 LT-B 转基因烟草植株的建立 1 1 2 1 1 1 2 1 1 刘红莉 ，雷 霆 ，张 铮 ，郑 瑾 ，来宝长 ，孔令洪 ，王喆之 ，王一理 ，司履生 （1. 西安交通大学生命科学与技术学院癌症研究所，陕西西安 710061；2. 陕西师范大学生命科学院，陕西西安 710062 ） 摘要：目的 构建大肠杆菌热不稳定肠毒素B 亚单位（LT-B ）基因的植物表达载体，并建立LT-B 转基因烟草植株。 方法 用PCR 从pMMB68 扩增LT-B 编码基因，将其克隆于pUCmT 和pBI121 载体，进而构建植物表达双元载体 pBI-LTB ，LT-B 基因由CaMV 35S 启动子控制表达；将pBI-LTB 用电穿孔法导入根瘤农杆菌LBA4404 ；采用叶盘共培 育法经根瘤农杆菌介导转化烟草，获得转基因烟草植株；用PCR、Southern 、Western blot 和ELISA 检测转基因植株。 结果 经PCR 及Southern 杂交分析，共发现12 株烟草的基因组中有LT-B 基因整合；Western blot 和ELISA 分析表 明有9 株转基因烟草能有效表达LT-B 蛋白，其表达量为烟草叶片总可溶蛋白的3. 36 ～ 10 . 56 µg ·g - 1 TSP 。结论 建立的LT-B 转基因烟草植株可成功表达LT-B ，并具有五聚体结构，为进一步生产预防婴幼儿大肠杆菌腹泻可食用 疫苗及黏膜免疫佐剂奠定了基础。 关键词：大肠杆菌热不稳定肠毒素B 亚单位；转基因烟草；植物疫苗；根瘤农杆菌 中图分类号： R378. 2 ；R394 . 33 文献标识码：A 文章编号：167 1-8259（2004 ）05-0425-05 The establishment of LT-B transgenic tobacco plants Liu Hongli ，Lei Ting ，Zhang Zheng ，Zheng Jin ，Lai Baochang ， Kong Linghong ，Wang Zhezhi ，Wang Yili ，Si Lüsheng （Institute for Cancer Research ，School of Life Science Technology ， Xi’an Jiaotong University ，Xi’an 7 10061，China ） ABSTRACT ：Objective o construct lant transforation vector containing !#$%’#$’( #)*’ eatlaile enterotoin suunit （ ）gene and estalis transgenic lants roducing large aount of roteins Methods e coding seuence as alified y it secific riers