仙客来与地被菊的花药培养分析-anther culture analysis of cyclamen persicum and ground cover chrysanthemum.docxVIP

摘 要 本研究对仙客来和地被菊两种观赏植物进行花药培养。对影响仙客来花药胚状体诱导和地 被菊愈伤组织诱导的各个因素进行了探讨；并对小孢子的发育过程进行了形态学观察；最后对 所得的地被菊植株进行了 ISSR 分析。 具体研究内容及结果如下： 1.花蕾的大小、颜色基本可以作为判断小孢子发育时期的一个简便而可靠的指标。当小孢 子处于单核靠边期时，仙客来的花瓣超出花萼 2mm～6mm 且花瓣为白色或粉红色；地被菊花 蕾直径 0.5cm ~ 0.8cm，花蕾圆心处的萼片尚未分开且透明，并且可观察到外围小花颜色为浅黄 色时为单核期。 .最适合仙客来外植体灭菌方法是：用自来水冲洗，在多菌灵固体制剂配成的 0.2%溶液中 浸泡 30min，转入超净工作台用无菌水冲洗两遍。然后用 70%酒精浸泡 30s，无菌水冲洗 1min， 再用 1.5% NaClO 浸泡 20min，无菌水冲洗 3 遍，每次 1min。 .不同基因型花药培养有显著的差异。仙客来五个品种中，‘哈里奥 2010’、‘哈里奥 2160’ 胚状体诱导率最高；地被菊的 7 个品种中，‘北林红’愈伤组织诱导率最高，其植株再生率也是 最高的。 .对两种植物的花药进行温度处理。结果表明，仙客来‘哈里奥 2010’低温预处理 48h 后， 胚状体诱导率为 17.8%，明显高于其他预处理。对于地被菊而言因品种不同对于温度处理的愈 伤组织诱导率反应也不同，但经过 72h 4℃低温预处理后植株再生率是最高的。 5.植物生长调节剂在两种植物的花药培养中起着重要的作用。结果表明，仙客来中不同品 种间胚状体诱导率有一定的差异。‘哈里奥 2010’在 0.02 mg/L NAA＋1.0 mg/L 6-BA 上的胚状 体诱导率最高，而‘哈里奥 2160’的胚状体诱导率在 0.1mg/L NAA＋1.0 mg/L 6-BA 上最高； 地被菊花药愈伤组织诱导率最高的植物生长调节剂浓度组合是 MS+6-BA1.0mg/l+2,4-D1.0mg/l， 但植株再生率最高的则是添加 MS+1.0mg/l NAA＋1.5mg/l 6-BA 的培养基。 .蔗糖浓度对仙客来花药培养的影响明显，结果显示，仙客来胚状体诱导率在添加 90 g/L 蔗糖的培养基上达 11.2%，是添加 60 g/L 和 120 g/L 蔗糖时的 2 倍多。 .活性炭对地被菊愈伤组织的诱导率没有影响。在培养基中加入 0.2%的活性炭，诱导率已 经下降为 0。由此可见，活性炭对地被菊小孢子胚胎发生产生了副作用，同时对其植株再生也 有相同的影响。 .对接种后的花药进行形态观察，显示小孢子发育的不同时期的变化。仙客来在接种 20 天 时小孢子分裂成四个核，30 天以后已开始形成花粉壁，35 天以后突破原花粉壁形成细胞团。地 被菊在接种 14 天时开始分裂成细胞团，形成愈伤组织。 .最后本研究对获得的地被菊花药培养的再生植株作了 ISSR 分析。结果显示多数再生植株 与母本有差异条带。 关键词：仙客来；地被菊；花药培养；组织学观察；ISSR 分析 Studies on anther culture of cyclamen and ground-covered chrysanthemum Postgraduate: zhang xiaoqing Supervisor: Yang Jishuang Specialty: Ornamental plants and horticulture Abstract In this study, two ornamental plants of cyclamen and ground-covered chrysanthemum were respectively for anther culture. The impact of anther embryoids induction or callus induction by various of factors and histological observation were studied. Finally, ISSR of the regenerated plants derived from anther culture of ground-covered chrysanthemum was analized. Specific studies and findings are as follows: Flower size and color can be used as judging microspore development stages simply and reliably.In cyclamen, the petals is longer