石见穿多糖抑制人胃癌细胞系mgc-803细胞增殖 迁移的作用及其对人胃癌细胞系mgc-803细胞中白细胞介素-8表达的影响-effects of lithopone on proliferation and migration of human gastric cancer cell line mgc - 803 and its effect on expression of interleukin - 8 in human gastric.docxVIP

中 文 摘 要  PAGE 54 石见穿多糖抑制人胃癌细胞系 MGC-803 细胞增殖、迁移的作用 及其对人胃癌细胞系 MGC-803 细胞中白细胞介素-8 表达的影 响 摘 要 目的： 体外应用石见穿多糖作用于人胃癌细胞系 MGC-803 细胞，观察其对 细胞迁 移 的 影 响 。 探 讨 体 外 石 见 穿 多 糖 是 否 能 够 抑 制 胃 癌 细 胞 系 MGC-803 细胞的迁移，以及应用石见穿多糖对胃癌细胞系 MGC-803 细胞 内白介素 8（interleukin-8，IL-8）蛋白表达水平的影响，为临床上对于胃 癌的治疗提供一定的理论依据。 方法： 1 利用水萃取法制备石见穿提取物，以改良的苯酚-硫酸法测定石见 穿多糖含量达 75.73%(以葡萄糖计)，最终配制成含石见穿多糖浓度为 100 mg?mL-1 的溶液。体外培养人胃癌细胞系 MGC-803 细胞。将人胃癌 MGC-803 细胞置于 37℃、5%CO2 的培养箱，用含 10%胎牛血清以及青、 链霉素各 100 U?mL-1 的 RPMI1640 培养液培养。倒置显微镜??观察细胞 生长情况，0.25%胰蛋白酶消化传代，取对数生长期细胞用于实验。 2（1）采用四唑盐比色(MTT)方法，观察石见穿多糖作用的人胃癌细 胞增殖活性的影响，本实验重复3次。（2）划痕实验及Transwell实验通过 划痕愈合率和穿膜细胞数来观察不同浓度石见穿多糖对同样条件培养下 胃癌细胞系MGC-803细胞迁移能力的影响，本实验重复3次。（3）采用 Western blot方法检测不同浓度石见穿多糖对 MGC-803细胞内白介素8 （IL-8）蛋白表达水平的影响，本实验重复3次。 3 统计学分析：所有数据资料以均数 ±标准差( x ±S)表示。采用 SPSS17.0 统计软件统计处理，总体采用方差分析，组间两两比较采用 LSD-t 检验。以 P0.05 为差异有统计学意义。 结果： 1 石见穿多糖作用的人胃癌细胞增殖活性的影响。  25μg/ml、50μg/ml 和 100μg/ml 浓度的石见穿多糖分别处理 24h、48h 和 72h 后，与对照组比较，人胃癌细胞的生长受到明显的抑制，25μg/ml、 50μg/ml 和 100μg/ml 的石见穿多糖在作用人胃癌细胞 24h 后，各组的抑 制率分别为 13.15±1.40%、20.24±1.8%、28.86±3.01%；作用 48h 后，各组 的抑制率分别为 19.26±2.61%、30.19±2.89%、63.21±6.39%；作用 72h 后， 各组的抑制率分别为 32.11±2.06%、47.00±5.77%、82.23±7.52%，且呈现 时间依赖性和剂量依赖性。经过统计学分析，各组之间差异具有统计学意 义(P 0.05) 。 2 划痕试验 相同条件培养 24h 后，未经石见穿多糖处理的胃癌细胞系 MGC-803 细胞运动迁移基本完全覆盖了划痕区域。然而，加入石见穿多糖以后， MGC-803 细胞的迁移能力明显减弱，细胞间划痕的距离缩短趋势减缓。 并且随石见穿多糖浓度的升高，迁移到划痕区域的细胞逐渐减少，划痕距 离增宽石见穿多糖浓度越高，表明 MGC-803 细胞的迁移受阻越明显。当 石见穿多糖浓度为 50g?L-1 时 MGC-803 细胞覆盖面积为（占原有划痕面 积百分比）：72.3±5.1%；当石见穿多糖浓度为 100 g?L-1 时，MGC-803 细胞覆盖区域面积（占原有划痕面积百分比）为 55.7±4.3%，且不同浓度 组间差别均具有统计学意义（p﹤0.05）提示石见穿多糖抑制 MGC-803 细 胞的迁移，且随药物浓度加大抑制作用逐渐加强。 Transwell 试验 相较于未进行药物处理的 MGC-803 细胞，经 50 g?L-1 和 100 g?L-1 石见穿多糖处理后，肿瘤细胞穿透 Transwell 小室孔膜的能力明显下降， 各个浓度组的穿膜细胞数随药物浓度的增加而明显减少。24 小时，对照 组、50 g?L-1 处理组、100 g?L-1 处理组的穿膜细胞数分别是：136+11.8； 61+7.4（p0.05）；32+8.1（p0.05）。24 小时，50 g?L-1 处理组、100 g?L-1 处理组的穿膜细胞的数量分别减少到对照组的穿膜细胞数的 59.5±4.7 和 20%±3.1。 Western-blot 经石见穿多糖处理过的 MGC-803 细胞中 IL-8 表达水平较对照组明显 降低，其蛋白表达总量随着石见穿多糖浓度的增加而减少。空白对照组、 低浓度（50g?L-1）处理组、高浓度（100g?L-1）处理组的 IL-8 蛋白条带相  对灰度分别为：0.988