蝴蝶兰的丛生芽组织培养技术..pptVIP

指导老师：王钰 08级 生物工程 谢熠 * 报告内容 1.实验背景 2.可行性分析 3.材料方法 4·实验结果分析 5.总结 * 可行性分析 1.实验操作简单，所要使用的仪器也不复杂。 2.蝴蝶兰来源比较广，如果想使用品种好的，可以去西部兰花基地购买。 3.有动手做实验的基础。 4.本学期上过的细胞工程有涉及到这类实验的内容，课堂上也看过类似的视频，所以都有理论基础。 * 实验背景 蝴蝶兰为著名的观赏兰科植物，其姿态优美，花色艳丽．花似蝴蝶，随风摇曳。翩翩起舞，尤为素净雅致，给人以洁净的美感。在热带兰中素有“兰花皇后” 的美称，深受世界各国人民的厚爱。近年来蝴蝶兰产业在我国发展迅速．中国大陆生产蝴蝶兰的大中型企业已达100多家，其数量仍在不断增加。 * 1蝴蝶兰属于典型的单茎性气生兰．植株上极少发育侧枝．比其它种类的兰花更难以进行常规无性繁殖 2蝴蝶兰种子内不含胚乳， 自然条件下很难萌发，发芽率极低。 3种子无菌播种萌发产生实生苗变异性大，不能良好的保持母本植株的品种特性，也会出现品种退化的现象，导致种苗质量差。 丛生芽途径繁殖蝴蝶兰 是一种从芽到芽的增殖途径．其优点是可以不通过诱导原球茎分化不定芽来达到稳定遗传母本的特征特 性，从而达到减少后代发生变异的目的，是蝴蝶兰快速而有效的繁殖方法，具有技术难度低、遗传稳定 * 团队简介 以前在微核实验中大家互相配合，很有默契，有一定的合作基础。 有两位队员曾经申请过创新实验项目，在理论部分也有扎实的基础。 * 供试材料 供试蝴蝶兰品种为Dtps．Taisueo FirebirdxDtps．China Huey Red Rose—Kung’s Valentine。 * 取样与消毒 剪取蝴蝶兰未开花粗壮的花梗，首先用流水冲洗30min。然后在超净工作台上进行以下操作：先用 75％酒精浸泡几秒钟．接着用0．1％氯化高汞(加吐温)消毒10 -15 min，再用无菌水冲洗5遍后，取出将 花梗切成长约2 cm带腋芽的切段。 * 丛生芽的诱导 将带腋芽的切段(约2 cm)基部向下插在MS培养基上，比较不同浓度6-BA(0．0、1．0、3．0、5．0、7．0 )mg／L对丛生芽诱导的影响。观察并统计诱导天数、诱导出丛生芽的个数以及诱导率． 对试验结果进行方差分析 丛生芽的增殖 (1)不同浓度的6-BA对丛生芽增殖的影响。将启动的丛生芽转至MS培养基上．比较不同浓度6-BA (0．0、2．0、4．0、6．0、8．0、10．0、12．0 mr,／L)对丛生芽增殖的影响。培养2个月后观察并统计蝴蝶兰丛生芽 的增殖个数、增殖率和生长情况。对试验结果进行方差分析。 * 不同浓度6-BA与NAA配比对蝴蝶兰丛生芽增殖的影响。将诱导出的丛生芽转至MS培养基上． 比较不同浓度6-BA与NAA配比(6一BA 8．0 mg／L，6-BA 6．0 mg／L+NAA 0．5 mg／L，6-BA 8．0 mg／L+NAA 0．5 mg／L，6-BA 10．0 mg／L+NAA 0．5 mg／L，6-BA 12．0 mg／L+NAA 0．5 mg／L)X~ 蝶兰丛生芽增殖的影响。 培养2个月后观察并统计蝴蝶兰丛生芽的增殖个数、增殖率和生长情况，对试验结果进行方差分析 * 生根培养 将培养所得的小苗转至不同生根培养基上(MS+NAA 0．5 mg／L．MS+IBA 0．5 mg／L．MS+NAA 0．5 mg／L+10％香蕉汁，MS+NAA 0．5 mg／L+10％椰子汁，MS+IBA 0．5 mg／L+10％香蕉汁，MS+IBA 0．5 mg／L+10％椰子汁)进行生根培养。培养40 d后观察并统计平均生根条数，对试验结果进行方差分析。 培养条件 培养温度(25+2)oC，光照强度1500～2000Ix，连续光照10～12 h／d。 * 出瓶 待培养瓶内小苗根长至8～10 cm左右，根数3～5条，叶数3～5片，叶宽1．5～2．5 cm，叶片生长健壮， 即可出瓶移栽。 * 意义 目前。蝴蝶兰组织培养研究大多采用原球茎途径。而丛生芽途径报道较少。蝴蝶兰丛生芽组织培养途径具有诱导率高，诱导时间较短，丛生芽增殖率也较高，可达3～5倍，而且具有技术难度低、遗传稳定等优点，在生产中可以避免产生大量的变异，在大规模生产上有着重要意义。因此，丛生芽诱导是一条快速繁殖蝴蝶兰的好途径。 * 注意事项 在蝴蝶兰丛生芽的增殖过程中．6-BA也是影响蝴蝶兰丛生芽增殖的重要因素之一．随着6-BA浓度的不断增加，丛生芽的增殖率也随着不断提高．而且适当浓度的6-BA和NAA混合使用能对蝴蝶兰丛生芽的增殖起到增效作用。 但在实际生产应用时，增殖率越高，试管苗的生势越差，而随着丛生芽的继代培养，内源激素会积累上升，故应调低