微小rna145靶向抑制hif-2α表达对神经母细胞瘤增殖 凋亡及血管生成的影响-effects of targeting inhibition of hif - 2α expression by microrna 145 on proliferation, apoptosis and angiogenesis of neuroblastoma.docxVIP

国家自然科学基金资助项目(编号81071997)教育部新世纪优秀人才支持计划(编号:NCET-06-0641)缩略词表缩略语英文全文中文全文ApATCCbpBSAcDNADEPCdNTPdsDNAECLEDTAFACSFBSGAPDHampicillinAmericanTypeCultureCollectionbasepairbovinealbuminserumcomplementaryDNAdiethylpyrocarbonatedeoxy-ribonucleosidetriphosphatedoublestrandedDNAenhancedchemi-luminescenceethylenediaminetetraceticacidfluorescenceactivatedcellsortingfetalbovineserumglyceraldehydes3-phosphate氨卞青霉素美国标准菌收藏所碱基对牛血清白蛋白互补DNA焦碳酸二乙酯三磷酸脱氧核(糖核)苷双链DNA增敏化学发光显色乙二胺四乙酸流式细胞术胎牛血清三磷酸甘油醛脱氢酶DehydrogenaGFPhHIF-2αHRPkDLBminmiRNAmolmRNAGreenfluorescentproteinhourHypoxiainducedfactor-2αhorseradishperoxidasekilodaltonlurib-BertanimediumminutemicroRNAmole(s)messengerRNA绿色荧光蛋白小时低氧诱导因子2α辣根过氧化物酶千道尔顿LB培养基分钟微小RNA摩尔数信使RNAMTT3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide四甲基偶氮唑蓝NBNeuroblastoma神经母细胞瘤ntNCODPAGEPBSPCRPIqPCRrpmRNaseRT-PCRsnucleotidenegativecontrolopticaldensitypolyacrylamidegeleletrophoresisphosphate-bufferedsalinepolymerasechainreactionpropidiumiodidequantitativePCRrevolutionsperminuteribonucleasereversetranscriptase-polymerasesecond核苷酸阴性对照光密度聚丙烯酰胺凝胶电泳磷酸盐缓冲液多聚酶链式反应碘化丙啶定量PCR每分钟转速核糖核酸酶逆转录酶-多聚酶链式反应秒SDSsodiumdodecylsulfatesiRNA十二烷基硫酸钠smallinterferingRNA小干扰RNATrisTEMEDVEGFμgtris(hydroxymethyl)aminomethanetetramethylethylenediaminevascularendothelialgrowthfactormicro-gram三羟基甲基氨基甲烷四甲基乙二胺血管内皮生长因子微克研究背景神经母细胞瘤(Neuroblastoma,NB)是一种常见于儿童的、源于交感神经系统的恶性胎源性肿瘤，占儿童和婴儿肿瘤的8%-10%，占儿童致死性肿瘤的15%，90%患者为5岁以下的儿童[1.2]。神经母细胞瘤可发生于交感神经系统的任何部位，最常见的发生部位是肾上腺髓质和交感神经链[3]，其生物学特性及临床表现差异较大，主要取决于发病年龄、发生部位和组织分化程度，恶性度极高，早期即可发生转移，但是部分病人也可以自然消退或转化成良性肿瘤。肿瘤是人体正常细胞发生过度增殖、凋亡减少所形成的新生物，肿瘤增殖和凋亡的失衡是一个多阶段、多步骤、极其复杂的肿瘤细胞与宿主之间相互作用过程，它涉及肿瘤细胞的多种生物学行为，神经母细胞瘤亦不例外。尽管对神经母细胞瘤增殖和凋亡的分子机制有了初步认识，但其确切分子机制仍不十分明确。microRNA(miRNA)是一种长约22nt的单链小分子RNA，广泛存在于真核生物中，是一组不编码蛋白质的短序列RNA，可通过与mRNA分子序列3非翻译区(3-UTR)互补相结合，参与基因转录后水平调控，呈现出组织特异性或发育阶段特异性表达特征。研究发现，miRNA在神经系统细胞的增殖与分化中扮演了重要角色[4]，并且在多种肿瘤组织及细胞系中检测到miRNA的异常表达，50%以上的miRNA基因位于肿瘤相关的基因组区域脆性位点，可能通过调节体内某些抑癌基因或癌基因的表达，在肿瘤的发生发展中发挥重要致癌或抑癌的功能[5]。miRNA通过多种机制导致肿瘤的发生，其中机制之一就是调节血管生成。研究发现miR-15b和miR-16通过调节血管