通过可诱导的信号途径提高植物的持续抗病性分析-analysis of continuous disease resistance improvement of plants through inducible signal pathway.docxVIP
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通过可诱导的信号途径提高植物的持续抗病性分析-analysis of continuous disease resistance improvement of plants through inducible signal pathway
学位论文独创性声明
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石河子大学硕士毕业论文通过可诱导信号途径提高植物的持续抗病性研究
石河子大学硕士毕业论文
通过可诱导信号途径提高植物的持续抗病性研究
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文献综述
一、植物抗病基因工程研究现状
能对农作物产生危害的最主要因素是病害,每年因此而导致的作物减产减收 给农业生产造成了巨大的经济损失。针对植物抗病机制的研究,不仅对于作物育 种具有重要理论意义,而且在抗病基因工程操作方面具有重要的指导意义。
植物的抗病机制异常复杂,许多年以来,人们一直在试图利用有性杂交,来解 决植物的抗病问题。但是,由于抗病植物种质资源的严重缺乏,再加上常规育种 方式具有周期长,病原小种分化的速度快等问题,使其在培育持久的抗病品种方 面具有很大的难度。近年来DNA重组技术取得了长足的进步,特别是对建立在 分子生物学基础上的植物抗病机制的研究和对抗病基因工程的研究方面取得了 重大的进展,这为以分子标记为辅助的基因工程在抗病育种方向谱写了新的篇 章,预示了美好的未来[1,2]。
1 抗病基因以及抗病基因的克隆
植物抗病基因工程可以分为广义的和狭义的两个方面。广义上的植物抗病基 因包含了病原菌的无毒基因和蛋白的拮抗基因、植物自身防御基因还有动物干扰 素基因、抗体基因和抗菌肽基因等等[3]。目前针对某些植物抗病基因的克隆可以 揭示他的结构和作用机制,从而极大的推动了植物抗病基因工程的研究进程[3]。 狭义上的植物抗病基因R(resistance gene)是指在寄生于寄主体内的可以特异的识 别病原物并且能够引起寄主的抗病响应的基因,他所编码的胞内受体蛋白和胞外 受体蛋白可以与病原菌的无毒基因Avr(avirulence gene)作用,这便组成了抗病反 应信号转导链中的开始部分,当其间接或直接的作用在病原菌的r基因所编码的 配体时,能够启动并且转导一系列的信号,并且可以激发寄主的超敏反应 HR(hypersensitive response)和系统获得抗性SAR(system acquired resistance)的抗 病反应。
1. 1 植物抗病基因R基因的克隆
R基因的绝大部分都是诱导表达的产物未知和性质未知的基因,其不适用传 统意义的基因克隆方法来进行分析。因此R基因的分离纯化一直都作为目前研究 中的重点和难点[4]。Johal等在1992年用转座子标签法(transposon tagging)第一次 克隆得到了植物R基因Hml。近年来由于R基因的图位克隆(positional cloning)等方 法的成功,已有20余个抗病基因被先后克隆出来[4]。图位克隆法的广泛应用,引 起了广大科研工作者的重视,下面将简要叙述该方法的原理。
1. 1. 1 转座子标签法 近年来研究比较成熟的基因克隆方法之一就是转座子标签法,而玉米的Ac/
Ds和Ac系统则是至今为止利用较为广泛的转座子。像N、Cf- 9、L6等抗病基因 均是通过这两个系统克隆所得到的[2]。其主要有下面这些步骤:目标植物被插入 转座子以后,可以随机产生一个突变体库,突变体中转座子插入于含有R基因较
为丰富的片段后,便只有含有R基因的突变体能够生存。这种方法可通过根据表 观不同的减少从很多的突变体中选育出靶R基因突变体的工作程度,同时还可以 降低错配率[2,4]。但是目前这个方法很难成功,并且它的实现基本是建立在R基因 激发HR导致其它突变体死亡的基础上的。例如带有N基因的野生型烟草,在接 种TMV病毒后放置于28℃下,N基因会激发HR从而导致烟草死亡;而当转座子 插入N基因失活时,烟草便不会死亡,并导致N突变体富集。由于突变体中存在 一些自发突变体,因此在我们得到突变体以后,应同时考证其表型方面和分子水 平方面,看其是否为由目的R基因的转座子插入所引发的突变体。验证后,则可 利用反式PCR扩增插入转座子的两端侧翼的已知序列,接下来以扩增产物为探 针,从基因文库或cDNA文库中筛选出目的R基因的克隆或其
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