大陆新发人兽共患肠道病毒-沙波（SaV）病毒的鉴定分析.ppt

大陆新发人兽共患肠道病毒-沙波（SaV）病毒的鉴定分析 排除黄痢等疾病。 PCV、PRC、TGEV、PEDV检测，结果阴性； RT-PCR检测SaV RNA。腹泻仔猪粪样中检测到SaV，健康仔猪粪样SaV 阴性； 测序、序列遗传进化分析； 动物（小型猪）回归试验（粪便悬液经过滤）。 小型猪回归实验表明： SaV可导致仔猪腹泻。其他症状也与猪场仔猪症状相同； 腹泻粪便样品中检测到SaV病毒； 说明猪场中造成腹泻、仔猪死亡的即为SaV病毒。 猪SaV中国株的全基因组测定与序列分析 根据GenBank上已提交的SaV全长序列，CLUSTAL比对后选择保守区域设计全长引物，共15套简并引物； 对5’和3’采用RACE方法扩增。 本分离株全长7558nt，包括9 nt的5’ UTR和14 nt的 3’ UTR； 同其他分离株一样本分离株含有两个开放式阅读框（ORFs）； ORF1：10～6774nt共6765nt，其中VP1从5140-6774nt共1635nt； ORF2：6771 ～ 7286nt共516nt。 ORF2编码区3’ 端变异较大。 全基因组同源性比较 基于VP1的系统进化分析 ORF2编码区3’ 端分析 SaV中国株小型猪感染模型的建立 技术路线 实验结果--体温 白细胞数目(WBC) 红细胞数目(RBC) 血小板数目(PLT) 临床观察 SaV攻毒后第2天猪即出现腹泻，直到第18天结束； 病毒检测结果 盲肠内容物中在攻毒第2天即检测到病毒，一直持续到实验结束（第36天）。 心脏，肝脏等组织和胆汁、血清中没有检测到病毒存在； 临床病理变化 扫描电镜照片 扫描电镜照片 对照组小肠绒毛。肠绒毛呈指状，表面规则 透射电镜 结论 SaV攻毒后第2天猪即出现腹泻，直到第18天结束； 与对照组相比，实验组在ALT、AST、ALKP等指标上无明显差异；攻毒后WBC、PLT在攻毒后急剧升高，随后下降；红细胞减少，体温有缓慢升高。 实验组猪剖检腹部胀气，胃和小肠充血； 盲肠内容物中在攻毒第2天即检测到病毒，一直持续到实验结束（第36天）； 血清、胆汁和各组织中均未检测到病毒存在。 扫描电镜结果显示，实验组胃有明显病变，黏膜部分脱落 ； 实验组小肠绒毛脱落，有部分破溃，微绒毛不规则、脱落，中间有裂纹 ； 投射电镜结果显示，实验组猪胃和十二指肠上皮细胞细胞器病变，细胞核部分破裂，线粒体空泡变。 华东地区猪群中SaV分子流行病学调查 2008年4-6月之间分别从上海、江苏、安徽采取新鲜猪粪样202、118、499份。 RT-PCR检测SaV病毒RNA。 核苷酸序列系统进化分析。 检测结果 序列进化分析 本研究共从上海、江苏、安徽等地猪粪便样品中检测到SaV42株，分离到5个核苷酸不完全相同的序列，序列间同源性为85.1-99.0%。一月龄一下的仔猪感染率最高，达7.2%。 进化分析显示这5株毒株中4株聚为一支，与荷兰分离株同源性较高；另一株与美国和巴西分离株聚为一支。 总结 首次在中国腹泻猪群中发现SaV病毒； 完成了SaV病毒的全基因组序列测定及分析（JV)； 系统地建立中国株巴马小型猪SaV感染模型； 初步调查了华东地区猪群中的SaV流行情况。 流行区域 美、英、日、韩等国已有人感染SaV报道； 日，美，韩，巴西等国已有猪SaV感染报道。其中巴西猪群SaV的感染率为高达30%。 中国之前还未见报道。 基因组结构 单股正链RAN病毒，基因组全长约7.5Kb。 G I、 G IV和GV 型含有3个主要的ORFs，而G II和G III含有2个ORFs。 ORF1编码非结构蛋白和主要外壳蛋白VP1，而ORF2和ORF3具体功能未知。 展望 SaV在中国猪群中的流行情况； SaV在中国存在哪些基因型？优势毒株？ 环境（特别是水体、水产品）中SaV的污染情况。 SaV的检测等防控措施研究（疫苗、受体、病原检测试剂盒等）。 谢 谢！ 6.4%(15/234) 3.4%(5/145) 0.8%(1/120) 11.7%(7/60) 6.1%(2/33) 0.0%(0/25) 7.9%(6/76) 5.4%(4/74) 3.8%（2/52） 阳性率 234 1以下 145 2-3 4.2%（21/499） 120 3以上 安徽 60 1以下 33 2-3 7.6%（9/118） 25 3以上 江苏 76 1以下 74 2-3 5.9%（12/202） 52 3以上 上海 总阳性率 样品数 月龄 取样地 沙波病毒（Sapovirus， SaV）最早从日本Sapporo地区一个婴儿之家爆发腹泻事件中发现的病毒，故又称札幌样病毒，现被归属为为杯状病毒科(Caliciviridae)。