化学发光免疫分析CLIA.PPTVIP

体外放射分析 山西医科医科大学第一医院核医学科 定义：全称体外放射配体结合分析---指在体外条件下，以放射性核素标记的配体为示踪剂，以结合反应为基础，以放射性测量为定量手段，对微量活性物质进行定量分析的一类检测技术的总称。 配体---能与结构上某一部位起互补结合的分子或化合物，如抗体、抗原，受体、蛋白激素 抗原的概念 抗原（antigen,Ag)：是一类能刺激机体免疫系统发生免疫应答，并能与相应免疫应答产物（抗体和致敏淋巴细胞)在体内外发生特异性结合的物质。 抗原的两种特性：免疫原性和抗原性 免疫原性（immunogenicity),能刺激机体发生免疫应答，产生抗体和致敏淋巴细胞的能力。 抗原性（antigenicity),能与相应抗体或致敏淋巴细胞发生特异性结合的能力。 基本定义 半抗原---分子量小于5000的肽类，需与载体蛋白结合才能引起免疫应答. 抗体（Antibody,Ab）是由B细胞识别抗原后增殖分化为浆细胞所产生的一类能和相应抗原特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。 主要内容 一.?? 概述 基本试剂 基本原理 操作过程 分离技术 质量控制 三．免疫放射分析（IRMA） 四.??非放射性标记免疫分析技术 酶免疫分析（EIA） 化学发光免疫分析（CLIA）　　　 时间分辨荧光免疫分析（TrFIA） 1.历史回顾 1959年Berson、Yalow开创了放射免疫分析。于1977年荣获诺贝尔生物医学奖。 1960年Ekins建立了竞争蛋白结合分析法。 1968年Miles和Hales建立了免疫放射分析。 近年来化学发光、电子化学发光、荧光时间分辨等非放射性标记免疫分析自动化技术先后问世，检测灵敏度提高到了10–15g。 2.类型：（据特异性结合试剂的不同分类） 放射免疫分析（RIA） 1959 竞争性蛋白结合分析（CPBA） 1963 免疫放射分析（IRMA） 1968 放射受体分析（RRA ） 70年代 放射酶学分析 70年代 放射微生物分析 其他非放射性标记免疫分析： 酶免疫分析（EIA） 化学发光免疫分析（CLIA）　　　 荧光免疫分析（FIA）　　　　　 时间分辨荧光免疫分析（TrFIA） 颗粒计数免疫分析（PACIA） ……　 主要内容 一.?? 概述 基本试剂 基本原理 操作过程 分离技术 质量控制 三．免疫放射分析（IRMA） 四.??非放射性标记免疫分析技术 酶免疫分析（EIA） 化学发光免疫分析（CLIA）　　　 时间分辨荧光免疫分析（TrFIA） 放射免疫分析（RIA) （Radioimmunoassay RIA） 基本试剂 基本原理 操作过程 分离技术 质量控制 125I的特性： 碘元素共有29种同位素，其中23种放射性核素，125I最为常用，优点： 半衰期适中（60天），易于商品化和储存，也利于废物处理； 只发射28keV χ线和35keV γ射线（无β），容易测量，辐射自分解少，标记物足够稳定； 化学性质活泼，标记容易，可得到多种标记物而广泛应用。 2、标准抗原（标准品） 是已知含量并呈梯度浓度的系列标准抗原，作标准曲线用。 要求： 保证与被测物具有相同的免疫活性和相同介质。 3、抗体 RIA使用：多克隆抗体 单克隆抗体 Ag *Ag Ab Bound Free B F B/F 部分游离抗原未被洗净---沉淀法和固相法 分离剂质量差或量不足 系统误差 表现为结果呈倾向性偏高或偏低。常见因素①方法误差：如标准品稀释不正确，分离效果不好等②仪器和试剂：仪器状态、量器、试剂纯度等③操作误差：操作习惯、加错样品等。通过努力系统误差可以消除。 随机误差 表现为某一管或某一部分样本的结果误差随机的、偶然的，小误差的概率大。常由操作者操作不当造成。 1、稳定性：指RIA实验批间的重复性。 标准曲线直线回归的参数 截矩a---稳定 斜率b---稳定 相关系数r99% ED25、 ED50、 ED75 即标准曲线在25%、50%、75%时横坐标上对应的抗原浓度值。反映标准曲线的稳定性。 2、精密度： 是对某一样品多次检测所得结果的符合程度。即复管的重复性。是最重要的质量参数。 3、灵敏度： 方法的最小可测值。计算方法是累计多批（一般10次）测量结果，计算出零