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6BA对大豆愈伤组织诱导影响初步研究 　　摘要：以大豆（Glycine max）品种吉农21的胚轴、子叶、子叶节、胚根为外植体，探讨了不同浓度6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）对大豆愈伤组织诱导的影响。结果表明，对于大豆无菌苗不同组织部位的外植体，MS+1.0 mg/L IAA +1.0 mg/L 6-BA 均为最佳的愈伤组织诱导培养基。 　　关键词：大豆（Glycine max）；吉农21；6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）；愈伤组织 　　中图分类号：Q813.1 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）16-3999-03 　　大豆（Glycine max）属于蝶形花科大豆属，别名黄豆，是古老的栽培作物之一，至今大约有四、五千年的种植历史。我国不仅种植大豆历史悠久，而且是栽培大豆的起源地，世界上其他国家的大豆大多是直接或间接从我国传播出去的。大豆的组织培养研究始于20世纪60年代，但各种外植体的组织培养与再生植株都十分困难。直到80年代中后期，大豆的组织培养工作才有了突破性的进展，大豆的组织培养常用外植体包括真叶、下胚轴、子叶、子叶节、胚轴和胚等[1-9]。近年来，也有报道可以通过胚尖诱导形成再生植株[10-12]，但多数再生体系再生频率低、重复性差，而愈伤组织再生体系与直接再生体系相比具有重复性好、出芽率高等特点。然而迄今为止，通过大豆愈伤组织途径获得再生植株的报道较少。本研究探讨不同浓度的6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）对愈伤组织诱导的影响，筛选出愈伤组织诱导的最佳培养基，进而能建立一个高效的大豆愈伤组织遗传转化受体系统。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　大豆种子吉农21由吉林农业大学生物技术中心提供。 　　1.2 方法 　　1.2.1 种子的萌发 选取饱满成熟的大豆吉农21的种子，用体积分数为70%的乙醇消毒30 s，再用质量分数为0.1%的升汞溶液消毒10 min，用无菌水冲洗3～5次后接种到MS基本培养基上，温度（25±2） ℃，光照度2 000 lx条件下进行培养。 　　1.2.2 愈伤组织的诱导 以培养7 d后的无菌实生苗的胚轴、子叶、子叶节、胚根为外植体，分别接种于不同愈伤组织诱导的培养基中，放入黑暗条件下进行培养，20 d后统计其愈伤组织诱导情况。愈伤组织诱导培养基分别为A培养基：MS+ 1.0 mg/L IAA + 1.0 mg/L 6-BA；B培养基：MS+ 1.0 mg/L IAA + 2.0 mg/L 6-BA；C培养基：MS+ 1.0 mg/L IAA + 3.0 mg/L 6-BA。 　　2 结果与分析 　　2.1 大豆胚轴愈伤组织的诱导 　　取培养7 d后的无菌苗的胚轴为外植体，分别接种到A、B、C 3种培养基上，黑暗条件下培养20 d（表1）。从表1中可以看出，对于胚轴来说，A培养基的诱导效果最好，愈伤组织诱导率达到98.1%，并且形成的愈伤组织颜色呈淡黄色，比较致密，状态良好（图1），而其他两种培养基上形成的愈伤组织褐化很多，可能是因为6-BA浓度过高引起的。 　　2.2 大豆子叶愈伤组织的诱导 　　取培养7 d后的无菌苗的子叶为外植体，分别接种到A、B、C 3种培养基上，黑暗条件下培养20 d（表2）。从表2中可以看出， 对于子叶来说，A培养基的诱导效果最好，愈伤组织诱导率可以达到100.0%，并且形成的愈伤组织颜色呈淡黄色，比较致密，状态良好（图2）。 　　2.3 大豆子叶节愈伤组织的诱导 　　取培养7 d后的无菌苗的子叶节为外植体，分别接种到A、B、C 3种培养基上，黑暗条件下培养20 d（表3）。从表3中可以看出来，对于子叶节来说，A培养基的诱导效果最好，愈伤组织诱导率可以达到97.4%，形成的愈伤组织颜色呈淡黄色，比较致密，状态良好（图3）。其他两种培养基较A培养基形成的愈伤组织褐化增多，愈伤组织的生长受到阻碍。 　　2.4 大豆胚根愈伤组织的诱导 　　取培养7 d后的无菌苗的胚根为外植体，分别接种到A、B、C 3种培养基上，黑暗条件下培养20 d（表4）。从表4中可以看出，对于胚根来说，A培养基的诱导效果最好，愈伤组织诱导率可以达到68.2%，形成的愈伤组织颜色呈淡黄色，比较致密，状态良好（图4）。其他两种培养基较A培养基形成的愈伤组织数目明显减少，褐化严重，愈伤组织的生长受到严重阻碍，可能由于根部对于细胞分裂素浓度更为敏感所致，高浓度的细胞分裂素抑制了根部愈伤组织的形成。 　　3 小结与讨论 　　在愈伤组织的诱导过程中，生长素和细胞分裂素的配合使用均能诱导4种外植体产生愈伤组织。不同的外植体对于激素的反应水平不同，胚根对细胞分裂素的浓度变化更为敏感，子叶，子叶节和胚轴则不敏感，高浓度的植物生长调节剂均能使外植体出现褐化。