1,252D3对进展性肾炎大鼠肾小管间质胶原蛋白Ⅲ表达影响.docVIP

1,25—(OH)2—D3对进展性肾炎大鼠肾小管间质胶原蛋白Ⅲ表达的影响 　　[摘要] 目的 探讨1，25-（OH）2-D3对进展性肾炎大鼠肾小管间质胶原蛋白Ⅲ（ColⅢ）表达的影响。 方法 将实验动物按随机数字表法分为3组（n=7）：假手术组（对照组）、进展性肾炎组（模型组）、6 ng/（100 g·d） 1，25-（OH）2-D3干预组（治疗组）。除对照组外，其余组均采用右肾切除并2次注射IgG（OX-7）鼠抗人Thy1.1单克隆抗体，制备进展性肾炎大鼠模型。1，25-（OH）2-D3干预8周后，检测各组大鼠24 h尿蛋白、血肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）及电解质的变化，Masson染色观察肾组织病理改变。免疫组织化学检测肾小管间质ColⅢ的表达。 结果 与模型组比较，1，25-（OH）2-D3治疗不仅使大鼠24 h尿蛋白及BUN均明显降低（P0.05），还能使ColⅢ表达显著下调（P0.05）。肾组织病理损害明显减轻。 结论 1，25-（OH）2-D3可能通过明显降低进展性肾炎大鼠肾小管间质ColⅢ的表达，减轻肾小管间质纤维化而发挥肾脏保护作用。 　　[关键词] 1，25-（OH）2-D3；ColⅢ；进展性肾炎；肾小管间质纤维化；大鼠 　　[中图分类号] R692.3 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）02（a）-0004-04 　　肾小管间质的细胞外基质过度沉积容易引起肾功能不全，常见于许多慢性肾脏疾病。间质胶原，尤其是Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原，通常作为肾组织基底膜的“脚手架”而普遍存在于肾脏中[1-2]。胶原及其相关分子在肾小管间质的积聚即可以定义为肾间质纤维化（renal interstitial fibrosis，RIF）。肾小管间质纤维化的病变程度严重影响了肾功能的正常运作。延缓或阻止肾小管间质纤维化的进展，可以预防慢性肾脏病的发生[3]。1，25-（OH）2-D3除调节钙磷代谢外，在调节各种生物过程（如免疫调节、细胞增殖和分化、抗纤维化、减少尿蛋白）中发挥至关重要的作用[4]。但是，1，25-（OH）2-D3对进展性肾炎肾小管间质纤维化的保护作用尚不完全清楚。本研究旨在探讨1，25-（OH）2-D3对进展性肾炎大鼠模型中RIF胶原蛋白Ⅲ（ColⅢ）表达的影响，并观察肾脏组织病理形态学的改变，便于进一步了解1，25-（OH）2-D3对进展性肾炎大鼠RIF的可能作用途径及影响机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验材料 　　1，25-（OH）2-D3购自美国Sigma公司，IgG（OX-7）鼠抗人Thy1.1单克隆抗体购于美国Neo Markers公司，大鼠ColⅢ免疫组织化学试剂盒购于武汉BOSTER生物工程有限公司。 　　1.2 仪器 　　全自动多功能生化分析仪（日本Hitachi公司）；光学显微镜（日本Olympus公司）。 　　1.3 动物模型制备及分组 　　雄性SD大鼠（重庆腾鑫生物技术公司提供，二级）21只，体重（131.2±10.0） g。将21只大鼠按随机数字表法分为3组（n=7）：假手术组（对照组，只做肾包膜剥离，不予肾脏切除）、进展性肾炎组（模型组）、6 ng/（100 g·d） 1，25-（OH）2-D3干预组（治疗组），选用进展性肾炎模型参照参考文献[4]，行右肾摘除术，分别于术后第1、2周予尾静脉注射IgG（OX-7）鼠抗人Thy1.1单克隆抗体1.2 mg/（kg·d），共2次。1，25-（OH）2-D3干预组于术后予1，25-（OH）2-D3 6 ng/（100 g·d）入饮水中灌胃至8周。所有大鼠均于8周后处死，收集24 h尿液，取大鼠心脏血并制作肾组织标本。 　　1.4 观察指标与方法 　　1.4.1 24 h尿蛋白定量 处死大鼠前3 d，将大鼠放入代谢笼中收集24 h尿液，每只收集3次，用双缩脲法测定尿蛋白含量，求平均尿蛋白含量。 　　1.4.2 血生化检测 取大鼠心脏血清，测定血肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）、钙、磷等。 　　1.4.3 肾脏组织病理学检查 肾组织以10%甲醛固定并编号，石蜡包被，2 μm厚连续切片，Masson染色，光镜下观察肾脏病理改变。细胞核染黑蓝色，胶原纤维呈绿色，肌纤维、红细胞呈红色。 　　1.4.4 免疫组织化学法检测 ColⅢ蛋白的表达：取2 μm厚石蜡切片，常规脱蜡至水，灭活内原性酶，热修复抗原，抗原抗体反应，DAB显色、脱水、透明、封片、显微镜观察。操作步骤按试剂盒说明书进行。阳性产物呈深褐色，不加抗体为阴性对照。 　　1.4.5 免疫组织化学分析 采用显微图像分析系统（Olympus C3040-ADU）对各组染色结果进行积分光密度值（integral optical de