M2M3受体自身抗体在肺心病发病中作用.docVIP

M2M3受体自身抗体在肺心病发病中作用 　　摘要：目的探讨肺心病痛人抗M2、M3受体自身抗体的产生、作用及其与右心结构的关系。方法 用SA－ELISA法对108例肺心痛病人和30名健康人血清中抗M2、M3受体自身抗体进行检测，并与血气分析及心脏超声学检查结果进行比较。结果肺心病组病人血清抗M2、M3受体自身抗体的阳性率及平均几何滴度[48.15％，80(1.846±0.351)；40.74％，53(1.725±0.273)]均高于对照组[13.33％，40(1.602±0.369)；10.00％，20(1.301±0.000)](P＜2受体自身抗体阴性组、阳性组指标比较及对照组与肺心病组中M3受体自身抗体阴性组、阳性组指标比较均表现为：血氧分压(PaCO2)呈逐渐降低趋势，二氧化碳分压(PaCO2)右室流出道内径、右室内径呈逐渐增高趋势(P＜0.05)。肺心病病人M3受体自身抗体单阳性组，M2受体自身抗体单阳性组，M2、M3受体自身抗体双阳性组在心脏指标方面，3组呈逐渐增高趋势(P＜0.05)。结论M2、M3受体自身抗体可能与肺心病的发病过程密切相关；M2、M3受体自身抗体可能与肺心病发病过程中的心脏损害有关；M2受体自身抗体在肺心病发病过程中可能起着较M3受体自身抗体更为主要的作用，两者在心脏形态学改变过程中可能起着协同作用。 　　关键词：肺心病；M2受体自身抗体；M3受体自身抗体 　　中图分类号：R541.5 R256.2 文献标识码：B　文章编号：1672―1349(2007)04―0295―03 　　 　　长期以来慢性肺源性心脏病(简称肺心病)研究主要集中在缺氧导致肺动脉高压引起肺心病这一主要机制上。但近年来一些研究发现，大多数肺心病病人仅为轻中度肺动脉高压[1，2]。单纯的肺动脉压力增高并不能完全解释慢性肺心病的发病机制。因此，推测可能还有其他因素参与肺心病的发病。有实验证明，肺心病在慢性发病过程中，伴有免疫系统紊乱，免疫细胞活性增高，免疫球蛋白含量增加[3]。提示免疫因素可能参与了肺心病的发生发展。目前研究已经证实心脏存在M2、M3受体。在肺心病大鼠模型中M2受体自身抗体的阳性率和滴度明显增高，且与大鼠左右心室病理改变高度相关。前期实验证实缺氧肺心病大鼠模型中抗M3受体自身抗体阳性率和滴度增高。这些都提示在肺心病病人出现右心衰竭的发病过程中可能也有心脏受体抗体的免疫学机制参与，尤其可能有M2、M3受体自身抗体的参与。因此，研究肺心病病人抗M2、M3受体自身抗体的产生、作用及其与右心结构的关系，为进一步探讨肺心病发病机制提供新的思路。 　　 　　1　资料与方法 　　 　　1.1　研究对象选取2005年4月―2006年11月我院住院及门诊的肺心病病人108例，所有入选病例均采用第二次全国肺心病专业会议制定的诊断标准[4]，明确诊断为慢性阻塞性肺疾病(COPD)所致肺心病急性发作期的肺心病病人；同时选取我院门诊体检健康人30名作为对照。所有人选者均记录病史、体格检查，并进行血气分析、心脏超声学检查。所有入选者均排除自身免疫性疾病及其他心脏疾病，近1个月未用免疫抑制剂治疗。 　　1.2 方法 　　1.2.1　标本采集所有受检者均于采血前12 h禁食，于清晨07：00～08：00抽取5 mL静脉血，静置，经4℃3000 r/min离心20 min，收集上清液(血清)，放人－70℃冰箱保存待测。 　　1.2.2　抗原肽段的合成 M3受体抗原肽段的合成：按照人M2－胆碱能受体细胞外第二环功能表位肽段序列(169～193位氨基酸残，V－R－T－V－E－D－G－E－C－Y－I－Q－F－F－S－N－A－A－V－T－F－G－T－A－I－C)，由武汉生物化学研究所合成。M3受体抗原肽段的合成：按照人M3－胆碱能受体细胞外第二环功能表位肽段序列(18～36位氨基酸残，S－S－W－I－H－S－P－D－G－L－P－P－G－T－V－T－H)，由西安美联生物科技有限公司合成。 　　1.2.3　链亲和素一酶联免疫吸附实验(SA－ELISA)　①包被抗原：将合成的M2、M3受体特异性抗原多肽配成浓度为5μL/mL的抗原包被液，包被空白ELISA反应板，4℃冰箱过夜。②封闭ELISA板：用含有5％小牛血清的磷酸盐缓冲液(1％PBS溶液，0.1％Tween20和5％小牛血清，pH 7.4，PMT)封闭ELISA板，37℃水浴1 h。③稀释血清：将待测血清从1:20的浓度起倍比稀释于PMT溶液中，加样于ELISA板，37℃水浴1h。④加标记有生物素的二抗：将生物素化羊抗人IgG单克隆抗体，按1:1000的浓度稀释于PMT溶液中，加样于ELISA板，37℃水浴1 h。⑤加标记有辣根过氧化酶的链亲和素将：SA－HRP以1:1000的浓