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340 中国科学 C 辑 生命科学 2006, 36 (4): 340~345 牛体外受精胚胎的基因组甲基化模式* ** 侯 健 刘 蕾 雷霆华 崔秀宏 安晓荣 陈永福 ( 中国农业大学生物学院和农业生物技术国家重点实验室, 北京 100094) 摘要 利用抗 5- 甲基胞嘧啶(5MeC)抗体免疫荧光法检测了体外成熟(IVM) 、体外受精(IVF)和 体外培养(IVC) 的牛合子及早期胚胎的基因组甲基化模式. 实验结果表明: 有 61.5% 的合子发生 了雄原核去甲基化, 而 34.6%的合子没有发生去甲基化; 当胚胎发育到 8-细胞时, 甲基化水平明 显下降, 且一直到桑椹胚期仍维持低甲基化状态, 但同一枚胚胎的不同卵裂球之间甲基化水平不 同; 在囊胚期, 内细胞团细胞的甲基化水平很低, 而滋养层细胞的甲基化水平却很高. 本研究结 果至少部分地提示, IVM/IVF/IVC 可能对牛合子及早期胚胎的甲基化模式有一定影响. 关键词 甲基化 胚胎 抗 5- 甲基胞嘧啶抗体 体外受精 牛 DNA 甲基化是哺乳动物最主要的表观遗传修饰, 实[7~10], 但在绵羊和兔的受精卵中没有观察到这一现 主要发生在基因组的CG二核苷酸的胞嘧啶上. DNA 象 [9,11], 暗示早期胚胎的甲基化模式可能存在物种差 甲基化与转录抑制有关, 参与调节基因的组织特异 异. 虽然牛早期胚胎的基因组甲基化模式已有报道, 性表达、X染色体失活、基因印记和染色质结构等生 但在不同的研究报道中, 关于精子基因组主动去甲 物功能 [1~3]. 在分化组织的细胞中, 基因组甲基化模 基化的程度以及重新发生甲基化的时期等方面的研 式相对稳定, 并随细胞分裂而传递. 但在哺乳动物发 究结果有所不同 [7~9]. 这可能与不同作者所使用的检 育过程中要经历两次广泛的基因组甲基化模式重编: 测方法和实验体系的差异有关. 一次在生殖细胞形成过程中; 一次在早期胚胎的着 基因组甲基化模式的重编可能与基因印记模式 [2] 床前发育过程中 . 的重建和发育全能性的恢复有关. 已有的研究显示, 在小鼠合子, 父本基因组在受精后不久即发生 异常的甲基化模式可能是导致胚胎发育失败的原因 快速的主动去甲基化过程 [4,5], 而母本基因组则在随 之一. 比如, 通过核移植技术生产的克隆胚胎存在明 后的卵裂过程中经历逐渐的、依赖于DNA复制的被动 显异常的甲基化模式 [7,8,12~15]. 因此, 了解早期胚胎 去甲基化 [6]. 小鼠早期胚胎主动和被动的去甲基化过 的基因组甲基化模式对研究胚胎发育机