032011研究生分生实验——转化20111(袁野).pptVIP

将重组DNA导入受体细胞的过程中叫做转化或转染。 细菌细胞能摄取外来DNA的生理状态称为感受态。 受体菌的改造与选择 限制与修饰系统：R-,M-或R-,M+的突变体，（R：restriction; M: modification）突变问题 重组系统：选用rec+的转化（提高转化效率），再转到rec-受体菌中保存（防止整合到染色体DNA基因组中去）。 选择能够发展成为感受态细胞的菌株做受体菌：肺炎双球菌、枯草杆菌、大肠杆菌、酵母系统。 根据ori选择受体细胞。 空菌? 不耐药？ 电击法:将细菌置入一定的容器内，通入高脉冲电压，使细菌处于感受态，此法成功效率高，可达1010/1ugDNA，但细胞容易死亡，约一半以上的细胞死亡。 化学法：如：Ca2+、DMSO、还原剂、氯化六氨合高钴等，成功率可达105-8/ug DNA。 6. 制备感受态菌时期选择： 细菌生长时相 转化最佳时期应选择在对数生长期的后期。OD550nm=0.2-0.3 （5-6?108细胞/ml） * * 基因工程的基本过程 分 切 接 转 筛 表 转 化 Transformation 感受态细菌的制备及转化实验 Department of biochemistry and Molecular Biology Yuan Ye 基本原理 然界的转化： 能自主复制； 具有两个以上的遗传标记基因