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Kai1在皮肤鳞状细胞癌中表达及意义 　　【摘要】目的：探讨Kai1在皮肤鳞状细胞癌(SCC)中的表达及意义。方法：采用免疫组织化学S-P法和核酸分子原位杂交技术分别检测10例正常皮肤、30例皮肤SCC中Kai1、Kai1 mRNA的表达；利用计算机图像分析系统采集、分析图像，并对数据进行统计学处理。 结果：Kai1、Kai1 mRNA在正常皮肤中均呈强阳性或阳性表达，在SCC中均呈弱阳性或阴性表达。两者在SCC中的表达均明显低于正常皮肤，差异均有统计学意义(P0.01)。结论：Kai1蛋白及其mRNA的低表达可能在皮肤SCC发生、发展的过程中发挥重要作用。 　　【关键词】Kai1；Kai1 mRNA；鳞状细胞癌 　　 　　Kail基因是近年来发现的一种新的肿瘤转移抑制基因，主要存在于细胞和其他组织表面，属于跨膜4超家族成员，具有介导细胞与细胞外基质的相互作用，牵涉到细胞融合作用、黏附、迁徙到凋亡、细胞形态学改变的生物学过程，其下调与许多肿瘤发生、发展及转移密切相关。我们采用免疫组织化学、原位杂交技术分别检测Kai1蛋白及其mRNA在皮肤SCC和正常皮肤组织中的表达，探讨Kai1与皮肤SCC发生、发展的关系。 　　1材料与方法 　　1.1实验标本标本来源于2006年1月至20010年12月遵义医学院第五附属（珠海）医院和中山大学附属第五医院病理科的存档病例，均经HE染色，光镜观察、确诊。SCC 30例（高分化25 例，中分化4例，低分化1例），其中男24例，女6例；部位：头皮2例，面部14例，下肢7例，阴茎7例;年龄36～84岁，平均63．03岁。患者术前均未行放射治疗和化学治疗。正常皮肤组织10例，取自临床手术切除的带有正常皮肤组织的病变标本。所有蜡块以4μm厚度连续进行切片。 　　1.2主要试剂兔抗人Kai1多克隆抗体、Kai1 mRNA寡核苷酸探针原位杂交试剂盒，均购自武汉博士德生物工程有限公司。S-P免疫组化试剂盒、DAB显色试剂盒均购自福州迈新生物技术开发公司。 　　1.3实验方法 　　1.3.1免疫组化染色（S-P法） 以前列腺组织为阳性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照，Kai1根据产品要求和预试结果确定为1:100，用专用抗体稀释液稀释。切片常规脱蜡至水，微波抗原修复，操作步骤按试剂盒说明书进行，经DAB显色，苏木素复染，脱水、透明，中性树胶封片，显微镜下观察，拍照。 　　1.3.2原位杂交(ISH)以滴加不含探针的预杂交液作为阴性对照，以前列腺组织为阳性对照，切片经65℃烘烤过夜，操作步骤按原位杂交试剂盒说明书进行，每张切片滴加20μl含Kai1 mRNA寡核苷酸探针的杂交液，40℃杂交过夜，DAB显色，苏木素复染，脱水干燥、透明，中性树胶封片，显微镜下观察，拍照。 　　1.4免疫标记结果判断Kai1蛋白和Kai1 mRNA以细胞质和细胞膜出现棕黄色颗粒为阳性细胞。阳性等级判定采用半定量积分法，包括综合染色程度和阳性细胞百分数两个方面，根据每张切片的阳性细胞百分数及着色深浅计分: 在400倍视野下，每张切片随机观察5个不同的视野，每视野计数100个细胞，分别记录每个视野阳性细胞数量并计算其算术平均值：阳性细胞数≤5%为0分，6% ~25%为1分，26%~50%为2分，51% ~75%为3分，＞75%为4分; 阳性强度:无着色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。然后根据二者记分相加判断阳性等级：0~1分为阴性，2~3分为弱阳性，4~5分为阳性，6~7分为强阳性。应用显微图像分析系统分别检测阳性染色的表达水平(阳性面积)及其表达强度(光密度)。 　　1.5统计学方法运用SPSS 13.0 统计软件包，数据均以表示，对结果进行t检验和相关分析，以P＜0.05有统计学意义。 　　2结果 　　2.1Kai1蛋白和Kai1 mRNA的表达Kai1蛋白和Kai1 mRNA在正常皮肤表皮组织中的表达均呈强阳性或阳性；在SCC组织中的表达分布：在高分化SCC的角化珠中呈阳性，而在其周边的癌细胞以及中分化SCC及低分化SCC中均呈弱阳性或阴性表达（结果如图1-4）。Kai1蛋白和Kai1 mRNA在皮肤SCC中的表达水平和表达强度均明显低于正常皮肤组，差异均有统计学意义（结果如表1）。 　　表1 Kai1在鳞状细胞癌与正常皮肤中的表达 　　注：S代表阳性面积代数和/分析区域面积的平均值 　　 G代表光密度 　　 P0.01 　　 　　2.2Kai1蛋白和Kai1 mRNA表达的相关性经过相关性分析, Kai1蛋白与Kai1 mRNA在皮肤SCC中的表达成正相关(R=0.751，P0.05)。 　　3讨论 　　皮肤鳞状细胞癌( squamous cell carcinom