凝胶过滤法脱离蛋白质.pptVIP

操作步骤 凝胶准备（已完成） 装柱（关?开?关） 样品处理 (3滴+8滴+2滴，已完成) 上样(开?关，加样0.2ml，开) 洗脱(3cm) 分部收集（10滴/min, 13滴/管） 测定A425(+2ml蒸馏水，空白管) 注意事项 1. 装柱后要检查柱床是否均匀，若有气泡或分层的界面时，需要重新装柱。 2. 上样时滴管末端一定要靠近凝胶柱表面(1cm)、沿柱内壁缓缓滴加，不能冲击凝胶柱表面。样品上柱后应在凝胶柱表面形成一层薄液层。 3. 收集要及时，不能等红褐色物质流出之后再收集(13滴/管)。 4. 流速不可太快(约10滴/min)。 5. 洗脱过程中要防止凝胶柱洗脱液流干(3cm)。 6. 洗脱完成后凝胶要回收，勿丢弃。 思考题 若洗脱图谱只出现一个峰，试分析可能的原因 * * 实验三 凝胶过滤法分离蛋白质 血红蛋白+高铁氰化钾 高铁血红蛋白 Mw=64 500 Mw=327.25 黄色(过量) 红褐色 实验原理 凝胶过滤法(分子筛层析/凝胶层析): 凝胶——多孔凝胶颗粒(分子筛)： 交联葡聚糖凝