PTTG和Cmyc在妊娠滋养细胞疾病中表达和意义.docVIP

PTTG和Cmyc在妊娠滋养细胞疾病中表达和意义 　　摘要：目的：探讨垂体肿瘤转化基因（PTTG）和C-myc在妊娠滋养细胞疾病（GTD）发生发展中的作用。方法：收集株洲市中心医院收治的GTD病例共55例，同时收集株洲市中心医院正常早孕行人工流产的绒毛标本21例作为对照。并应用免疫组化SP法检测21例正常的早孕绒毛、15例完全性葡萄胎、10例部分性葡萄胎、14例侵蚀性葡萄胎与15例绒癌石蜡包埋组织中PTTG和C-myc的蛋白表达情况。结果：PTTG和C-myc蛋白在细胞滋养层细胞和合体滋养细胞都表达，两者在正常早孕绒毛与GTD中主要表达于细胞浆，偶表达于细胞核。正常早孕绒毛、葡萄胎、侵蚀性葡萄胎和绒癌中PTTG蛋白的阳性表达率分别为14.3％、24.0％、78.6％、80.0％；C-myc蛋白的阳性表达率分别为23.5％、30.0％、71.4％、73.3％。PTTG和C－myc在正常早孕绒毛和葡萄胎中的表达量差异无显著性意义（P＞0.05）；侵蚀性葡萄胎和绒癌的表达量明显高于正常早孕绒毛和葡萄胎（P＜0.05)；绒癌的表达量高于侵蚀性葡萄胎，但差异无显著意义（P＞0.05）。在GTD中，PTTG和C-myc的蛋白表达呈正相关（R＝0.724, F=49.663,P＜0.05 )。 　　结论PTTG和C-myc的表达上调可能是滋养细胞恶性转化的早期事件，并在GTD的恶化进展中起重要作用。 　　?? 　　 　　关键词：妊娠滋养细胞疾病；PTTG；C-myc；免疫组织化学 　　 　　【中图分类号】R737.3 【文献标识码】A 【文章编号】1672-8602(2014)05-0016-02 　　 　　葡萄胎发病率在世界不同地区变化很大，亚洲国家比欧洲或北美高3～10倍，葡萄胎是包括我国在内的东南亚国家常见病之一，我国葡萄胎平均发病率为290/10万 ????[1]??，其中10～20％在清宫后恶变为侵蚀性葡萄胎或绒癌，早期即可经血液途径转移至肺?p脑等处，严重危害妇女的健康。葡萄胎恶变的机制仍不十分清楚，近年来发现PTTG基因的表达与肿瘤的发生、发展密切相关。 　　据已有的报道，关于PTTG基因在肿瘤形成中的作用研究集中在卵巢癌，垂体瘤中，而在滋养细胞肿瘤中的作用机制研究很少。本研究通过SP免疫组化的技术对正常妊娠绒毛组织和GTD中的PTTG及C-myc蛋白的表达情况进行检测，比较两者的表达水平，从而探讨PTTG与C-myc在GTD的发生发展中的作用及可能的作用机制作初步探讨。?? 　　 　　1 资料和方法?? 　　1.1 组织来源： 　　正常早孕绒毛组（Normal chorionic villi of first trimester,N）:选取株洲市中心医院妇产科门诊2013年12月至2014年2月正常早孕行人工流产的绒毛标本21例，年龄21～38岁，平均（27±4）岁，均无异常妊娠史。取上述正常早孕行人工流产的绒毛标本，石蜡包埋，作HE染色和免疫组化实验用。 　　GTD组： 收集株洲市中心医院病理科存档GTD石蜡包埋标本共55例，其中部分性葡萄胎10例，年龄20～43岁，平均（31±7）岁；完全性葡萄胎15例，年龄22～47岁，平均（29±8）岁；侵蚀性葡萄胎14例，年龄31～49岁，平均（43±6）岁；绒毛膜癌15例，年龄29～54岁，平均（43±9）岁。?? 　　 　　 　　1.2 方法免疫组化检测PTTG和C-myc蛋白的表达： 　　(1)HE染色 　　全部收集的标本均经4％中性甲醛液固定，梯度脱水、浸蜡和包埋。所取蜡块行5μm连续切片、烘烤、脱蜡、HE染色、透明和封片。 　　(2) 采用SP法进行免疫组化检测，具体步骤如下： 　　① 石蜡切片，厚5μm，用经多聚赖氨酸处理的载玻片捞片，置烤箱60℃，60分钟。 　　② 切片脱蜡至水：二甲苯浸泡30分钟×2次；100％乙醇浸泡30分钟×2次，95％、85％、75％乙醇依次浸泡各10分钟；蒸馏水浸泡5分钟×3次。 　　③ 抗原修复处理：按不同的抗体要求进行抗原修复。以0.01M，pH6.0柠檬酸高压或微波炉修复。室温冷却后，蒸馏水浸泡5分钟×3次，继以0.01M PBS浸洗5分钟×3次。 　　④ 滴加A液（3％过氧化氢溶液）25μl，室温避光孵育30分钟，以灭活内源性过氧化氢酶活性；0.01M PBS冲洗5分钟×3次。甩去多余液体。 　　⑤ 滴加B液（封闭用正常山羊血清工作液）25μl，室温孵育30分钟。 　　⑥ 甩去山羊血清，滴加鼠抗人第一抗体25μl，4℃孵育过夜，0.01M PBS冲洗5分钟×3次。甩去多余液体。 　　⑦ 滴加C液（生物素化二抗工作液）25μl，室温孵育30分钟，0.01M PBS冲洗5分钟×3