PUMA蛋白在皮肤鳞状细胞癌中表达和意义.docVIP

PUMA蛋白在皮肤鳞状细胞癌中表达和意义 　　[摘要]目的：探讨PUMA（p53 up-regulated modulator of apoptosis，P53上调凋亡调控因子）蛋白在皮肤鳞状细胞癌中的表达及意义。方法：采用免疫组化SP法观察36例皮肤鳞癌组织和25例正常皮肤组织石蜡标本中PUMA蛋白的表达情况。结果：皮肤鳞状细胞癌（SCC）组织中PUMA蛋白阳性表达率（25.18%）明显低于正常皮肤组织（78.00%）（P0.05）；SCC中低分化组的PUMA蛋白的阳性表达率低于高分化组（P0.05）。结论：PUMA蛋白表达下调可能使细胞恶性转化和增殖。 　　[关键词]皮肤鳞状细胞癌（SCC）；PUMA；免疫组化 　　[中图分类号]R739.5 [文献标志码]A [文章编号]1008-6455（2015）01-0027-03 　　皮肤鳞状细胞癌（ cutaneous squamous cell carcinoma， SCC） 是一种常见于头面部的恶性肿瘤，随着社会的发展，其已成为头颈外科及整形外科的一种常见病。PUMA是Yu等[1]于2001年发现的Bcl-2家族BH3-only亚家族中的成员之一，因其可被p53快速诱导并具有强大的促凋亡作用而得名。鉴于其在p53依赖与非依赖途径的细胞凋亡启动和肿瘤发生过程中有重要作用，遂渐成近来研究的热点之一。但目前在皮肤鳞状细胞癌组织中PUMA蛋白的表达情况及与皮肤鳞状细胞癌的病理特征之间的关系鲜见报道。本研究采用免疫组化SP法，通过对PUMA蛋白在SCC及正常皮肤组织中的表达情况进行检测，为探讨它们在SCC发生发展中的意义提供依据。 　　1 材料和方法 　　1.1 研究对象：石蜡组织选用我院病理科2007年3月-2014年6月切除且病理确诊的皮肤鳞状细胞癌组织36例，年龄47～80岁（平均66.4岁），男20例，女16例；组织学分级：高分化16例、中分化11例、低分化9例；患者无合并皮肤病、结缔组织病、免疫系统疾病及其它重要脏器疾病；患者术前均未进行放疗、化疗、免疫、冷冻、激光等治疗。25例正常皮肤组织（对照组）为我院头颈乳腺科非癌患者术中修剪或行全厚皮移植时经修剪剩余的全厚皮。 　　1.2 主要试剂：鼠抗人PUMA单克隆抗体（浓缩型）、SP免疫组化试剂盒（浓缩型）均购自北京中杉金桥生物科技公司。 　　1.3 方法 　　1.3.1 免疫组化：采用免疫组化SP法，实验步骤严格按照试剂盒说明书进行，用PBS液代替一抗作阴性对照，用已知的阳性切片作阳性对照，PUMA蛋白（工作浓度为1：50）染色阳性反应信号呈棕黄色细小颗粒，主要位于细胞质，部分位于胞膜。 　　1.3.2 统计学处理：采用SPSS17.0统计软件对数据进行χ2检验，检验水准α=0.05。 　　1.3.3判断标准：①根据着色的强弱，染色强弱以多数细胞的呈色反应为准：不着色为0分，浅黄色为1分，深黄色为2分，棕黄色为3分；②先在低倍镜下选取细胞分布均匀的视野，再在高倍镜视野下用CMIAS病理彩色图像分析系统进行图像分析，每张切片计数500个细胞的阳性细胞数，计算出阳性细胞的百分比，用%表示即：阳性细胞率=（阳性细胞数/500）×100%。然后根据阳性细胞百分比记分70%为3分。根据上述两项的记分之和将PUMA蛋白结果记为：阴性（-），阳性（+～+++）。 　　2 结果 　　正常皮肤及SCC中PUMA蛋白的表达情况 PUMA蛋白在正常皮肤及SCC中主要表达于细胞质，见图1。在正常皮肤组织中的表达阳性率为76.00%，在SCC中的表达阳性率为30.56%，两者差异有统计学意义（P0.05）。PUMA蛋白的表达与SCC临床病理特征之间的关系见表1。 　　3 讨论 　　2001年，YU等[1]采用SAGE（sefial analysis gene expression）技术、Nakano[2]用微阵列技术分别从人类成骨细胞样细胞和结肠癌细胞系中分离出了一种新的具有促凋亡作用的p53靶基因，命名为PUMA；同年Han[3]等用酵母双杂交技术在研究人淋巴细胞Bcl-2结合元件时从cDNA文库中分离出来与PUMA序列相同的基因，称为Bbc3（Bcl-2 binding component 3）。PUMA（p53 up-regulated modulator of apoptosis，P53上调凋亡调控因子）蛋白是Bcl-2蛋白家族中BH3-only亚家族的一员，仅含一个BH3结构域，定位于线粒体外膜，BH3-only蛋白是介导哺乳动物细胞凋亡反应的基本因子[4]。PUMA蛋白可以被P53快速诱导转录且其编码的蛋白具有强大的促进凋亡作用。有研究表明PUMA在正常和异常细胞的p53依赖与非依赖的凋亡途径及肿瘤的发生、