Ca2对杜仲愈伤组织诱导及增殖效应影响研究.docVIP

Ca2对杜仲愈伤组织诱导及增殖效应影响研究 　　摘要：以杜仲（Ｅｕｃｏｍｍｉａ ｕｌｍｏｉｄｅｓ）幼茎为外植体，进行杜仲愈伤组织诱导、增殖实验。在培养基中添加不同浓度的Ｃａ２＋进行筛选实验，以确定诱导、增殖培养基中的最佳Ｃａ２＋浓度。结果表明适度增加Ｃａ２＋浓度，可促进杜仲愈伤组织的诱导和增殖，并能改善愈伤组织的生长状态，增加愈伤组织增殖生长量。但若Ｃａ２＋浓度超过１２．０ ｍｍｏｌ／Ｌ，促进效果减弱。 　　关键词：杜仲（Ｅｕｃｏｍｍｉａ ｕｌｍｏｉｄｅｓ）；Ｃａ２＋；愈伤组织；增殖 　　中图分类号：Ｓ５６７．１＋９文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０11）13－2780-03 　　 　　Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｃａ２＋ ｏｎ Ｃａｌｌｕｓ Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｅｕｃｏｍｍｉａ ｕｌｍｏｉｄｅｓ 　　 　　ＹＵＡＮ Ｙｕｎ－ｘｉａｎｇ 　　（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ａｎｄ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｗｅｉｎａｎ Ｔｅａｃｈｅｒｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｅｉｎａｎ ７１４０００，Ｓｈａａｎｘｉ，Ｃｈｉｎａ） 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｓｔｅｍｓ ｏｆ Ｅｕｃｏｍｍｉａ ｕｌｍｏｉｄｅｓ ｗｅｒｅ ｔａｋｅｎ ａｓ ｅｘｐｌａｎｔｓ ｆｏｒ ｃａｌｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ． Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａ２＋ ｗａｓ ａｄｄｅｄ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｍｅｄｉｕｍ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｉｔｓ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｕｃｏｍｍｉａ ｃａｌｌｕｓ． Ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｐｒｏｐｅｒ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａ２＋ ｐｌａｙｅｄ ａｎ ａｃｔｉｖｅ ｒｏｌｅ ｉｎ ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｕｃｏｍｍｉａ ｃａｌｌｕｓ， ｂｏｔｈ ｔｈｅ ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ａｎｄ ｑｕａｎｔｉｔｙ ｏｆ ｉｎｄｕｃｅｄ ａｎｄ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｅｄ ｃａｌｌｕｓ ｗａｓ ｅｎｈａｎｃｅｄ． Ｂｕｔ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｉｆ Ｃａ２＋ ｉｎ ｔｈｅ ｍｅｄｉｕｍ ｗａｓ higher ｔｈａｎ １２.0 ｍｍｏｌ／Ｌ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｅｕｃｏｍｍｉａ ｕｌｍｏｉｄｅｓ； Ｃａ２＋； ｃａｌｌｕｓ； ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ 　　 　　杜仲（Ｅｕｃｏｍｍｉａ ｕｌｍｏｉｄｅｓ）是杜仲科（Ｅｕｃｏｍｍｉａｃｅａｅ）杜仲属（Ｅｕｃｏｍｍｉａ）多年生落叶乔木，是我国特有的经济树种、国家二类重点保护植物，也是名贵的中药材和提胶工业原料。杜仲的干燥树皮含有丰富的生物活性成分，具有补肾、健腰、强筋、壮骨、安胎等功效，可以提高机体缺氧耐力、改善机体免疫功能、降低血脂、平衡调节血压，且久服轻身耐老、延年益寿［１］。但杜仲树生长缓慢、栽培周期长，剥皮对树的生长有影响，限制了杜仲药材的产量。曾黎琼等［２］研究表明，杜仲愈伤组织中含有与叶和皮相同的药用成分。因此，利用植物组织培养技术获得次生代谢产物有望成为大规模生产杜仲有效药用成分的主要手段［3］。本实验通过改变培养基中Ｃａ２＋浓度，筛选适于杜仲愈伤组织诱导和增殖的Ｃａ２＋浓度，以期进一步提高杜仲愈伤组织诱导、增殖率，为大规模生产杜仲次生代谢产物提供参考。 　　１材料与方法 　　１．１材料 　　以渭南师范学院校园栽培一年生杜仲嫩枝条为实验材料。 　　１．２方法 　　１．２．１杜仲愈伤组织的诱导剪取一年生杜仲嫩枝条，放入烧杯中加入适量洗衣粉，在自来水下冲洗２ ｈ左右，再用蒸馏水冲洗５ ｍｉｎ，于超净工作台内，先用７５％酒精处理３０ ｓ，再用０．１％氯化汞处理１２ ｍｉｎ，然后用无菌水冲洗５～６次，将幼嫩茎段切成１．０～１．５ ｃｍ长作为外植体，每瓶接种３个外植体，诱导培养基为：ＭＳ＋１.0 ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ＋０．１ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋０．７％琼脂＋３％蔗糖＋５００ ｍｇ／Ｌ脯氨酸＋３００ ｍｇ／Ｌ水解酪蛋白＋１％ ＰＶＰ，ｐＨ值６．０，培养基中添加Ｃａ２＋浓度梯度为０、３．０、６．０、９．０、１２．０、１５．０、２０．０ ｍｍｏｌ／Ｌ，每个浓度梯度设置３个重复。在（２２±１）℃、光照强度为１ ５００～２ ０００ ｌｘ条件下每天光照１３ ｈ，诱导愈伤组织形成，３周后统计诱导率，并观察愈伤组织生长状态。 　　１．２．２杜仲愈伤组织的增殖茎段在培养基上诱导２１ ｄ后，将质地相当的淡黄绿色、较疏松、有光泽、生长旺盛的愈伤组织块小心切下，继代于增殖培养基（