小动物活体光学成像在神经性疾病研究中应用.pdfVIP

小动物活体光学成像技术在神经疾病研究中的应用 PerkinElmer 小动物活体光学成像技术已在生命科学基础研究、临床前医学研究及 药物研发等领域得到广泛应用。在众多应用领域中，神经疾病研究是活体光学成像技术 的应用热点之一。在应用活体光学成像技术进行神经相关疾病研究中，常用的标记方法 及应用领域包括：1、利用萤火虫荧光素酶（Firefly Luciferase ）或荧光蛋白作为报告基 因，通过转基因技术体外转染神经肿瘤细胞、神经干细胞等细胞，进行神经肿瘤、神经 发育及细胞治疗的相关研究；2 、利用荧光素酶作为报告基因标记神经疾病相关基因构 建转基因动物，进行神经疾病机理研究；3、利用功能性荧光探针监测神经疾病的发生 发展。下面结合一些具体实例进行阐述： 一.神经肿瘤研究 与其它类型肿瘤研究类似，利用小动物活体光学成像技术可以长期监测神经肿瘤的 发生发展及治疗效果。例如，利用荧光素酶基因标记肿瘤细胞，通过肿瘤发光情况的变 化，观测肿瘤的生长及药物对于肿瘤的治疗效果，如下： 上图：应用IVIS 系统长期观测原位接种的经生物发光标记的U87-MG-luc2 神经胶质瘤的生长。 上图：应用IVIS 系统观测血管生成抑制剂对U87-MG-luc2 生长的移植。A.对照组；B.给药组 除了利用生物发光成像技术进行神经肿瘤研究，还可应用功能性荧光探针监测肿 瘤，例如，通过应用荧光染料标记的 DHE 探测神经胶质瘤中的活性氧自由基，从而监 测肿瘤的发展情况。基于 IVIS 系统的多模式成像功能，可以同时应用生物发光及荧光 成像功能共同监测肿瘤，如下： 上图：左.应用荧光成像技术观测尾静脉注射DHE 后观测DHE 对肿瘤的靶向；中.应用生物发光成像技术观 测经荧光素酶基因标记的肿瘤；右.荧光与生物发光成像结果融合。 二.神经退行性疾病的研究 神经退行性疾病是由神经元或其髓鞘的丧失所致，随着时间的推移而恶化，以导致 功能障碍。常见的神经退行性疾病包括阿兹海默症、帕金森氏病、多发性硬化症、脊髓 性肌萎缩症等。应用小动物活体成像技术进行上述疾病相关研究的主要方式为：1、通 过构建生物发光标记的疾病动物模型，观测疾病特异性基因的表达，进而反映疾病的发 生发展；2 、应用功能性荧光探针观测疾病特异性标识物，进而反映疾病的发生发展。 下面以阿兹海默症的研究为例进行阐述： 阿兹海默症 （Alzheimer disease，AD ），是一种中枢神经系统变性病。AD 的病因及 发病机制尚未阐明，特征性病理改变为β 淀粉样蛋白沉积形成的细胞外老年斑和tau 蛋 白过度磷酸化形成的神经细胞内神经原纤维缠结，以及神经元丢失伴随胶质细胞增生 等。基于特殊的病理特征，研究者可以通过不同思路应用活体光学成像技术，对阿兹海 默症进行观测。 如Wattnoek 等人基于阿兹海默症的发生伴随胶质细胞增生的病理特征推测，伴随 阿兹海默症的发生发展，胶质细胞中胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein, GFAP ）的表达量也会增多。利用Western Blot 及免疫组化等技术手段进行体外实验显示， 随着β 淀粉样蛋白表达的增多，GFAP 的表达量也同时增多，两者在疾病发展过程中成 正相关，说明GFAP 可以作为阿兹海默症的特征性蛋白而反映阿兹海默症的发生发展。 接着，研究者将Tg(GFAP-luc)生物发光转基因小鼠与阿兹海默疾病模型小鼠Tg(APP23) 及Tg(CRND8)进行杂交，构建出Tg(APP23:Gfap-luc) 和Tg(CRND8:Gfap-luc)双转基因 生物发光-阿兹海默疾病模型小鼠，并应用IVIS 系统在活体水平观测阿兹海默症的发生 发展。结果显示，在两种双转基因疾病模型小鼠中，GFAP 的表达量均随阿兹海默症病 情的恶化而升高，说明 GFAP 可以表征阿兹海默症的发生发展；另外，将病情严重的老 年疾病小鼠脑匀浆注射入年轻疾病小鼠脑内，会使年轻疾病小鼠中 GFAP 表达量的增多 明显提前，说明老年疾病小鼠脑匀浆物质能够加速年轻疾病小鼠阿兹海默症的发生。综 上所述，通过利用荧光素酶标记疾病相关基因而构建的转基因小鼠，并结合活体光学成 像技术，可以在活体水平观测神经退行性疾病的发生发展，并开展相关治疗的研究。 上图：体外分析GFAP 的表达与阿兹海默症的关系。A.应用Western blot 技术分析GFAP 及Aβ 在不同年龄 的两种阿兹海默疾病模型小鼠中的表达情况；B.定量分析显示GFAP 与Aβ 的