基因重组工程.pptVIP

四、DNA连接酶(DNA ligase) DNA连接酶可以 催化带有粘性末端或平头末端的双链DNA中一条链的3ˊ－OH与另一条链的5ˊ－PO3H2形成磷酸二酯键而相连，从而构成一条完整的DNA长链。 DNA连接酶的用途 （1） 两个双链DNA片段连接起来 5ˊ- ACG AATTCGT-3ˊ T4DNA连接酶 5ˊ-ACGAATTCGT-3ˊ 3ˊ- TGCTTAA GCA-5ˊ 3ˊ-TGCTTAAGCA-5ˊ （2） 修补带有缺口的双链DNA分子 T4DNA连接酶 五、碱性磷酸酶 碱性磷酸酶(BAP) 能够催化水解去除DNA或RNA5ˊ-端的磷酸基团。 用途 ⒈ 制备载体时，用碱性磷酸酶处理去除载体分子 5ˊ－端磷酸基后，可防止载体自身环化连接，提高重组效率。 ⒉ 用32P标记5-端前，去除5-P，再通过激酶作用把放射性核苷酸加到5-端进行标记。 六、末端 （脱氧核苷酸）转移酶(TdT) 作用 将标记或未标记的dNTP加到DNA的3ˊ—OH末端；也可催化载体分子或待克隆的DNA片断上加上互补的同聚尾，便于进一步连接。 应用 ① 探针标记 P32-α.dGTP G32G32