一种优化橡胶树木质部石蜡切片制作方法.docVIP

一种优化的橡胶树木质部石蜡切片制作方法 　　摘 要 针对常规石蜡切片方法无法制得橡胶树木质部切片的问题，优化了橡胶树木质部切片制作方法并进行了验证评估。以3龄和30龄的橡胶树木材为材料，经FAA固定、乙醇预处理后，增加了以冰醋酸软化木质部这一步骤，用正丁醇取代二甲苯进行组织透明，其余步骤参考常规方法。结果表明，优化的石蜡切片方法可制作出完整、高质量的木质部切片，其木纤维的长度、宽度与硝酸离析所得到的木纤维一致度高，为橡胶树成龄木材的解剖学研究提供了方法。 　　关键词 橡胶树 ；木质部 ；石蜡切片 ；木纤维 　　分类号 S794.1 　　An Improved Method for Paraffin Section Preparation of Hevea Xylem 　　CAI Haibin TU Min HU Yanshi 　　CHENG Han AN Zewei HUA Yuwei HUANG Huasun 　　（Rubber Research Institute / 　　Ministry of Agriculture Key Laboratory of Biology and Genetic Resources of Rubber Tree / 　　State Center for Rubber Tree Breeding， CATAS， Danzhou， Hainan 571737） 　　Abstract In this paper， we improved and evaluated paraffin section method of Hevea xylem compared to the conventional method. 3-year-old and 30-year-old rubber tree woods were collected， fixed in FAA， pretreated by ethanol， softened by acetic acid and transparentized by n-butanol replacing xylene. The remaining steps referenced conventional method. The result indicated that the improved method could produce complete， high quality paraffin section of Hevea xylem. The length and width of wood fiber by paraffin section had high consistency with those obtained by nitrate segregation， which provided a method for the study of mature Hevea wood anatomy. 　　Keywords Hevea brasiliensis ； xylem ； paraffin section ； wood fiber 　　中国位于太平洋西岸，海南和广东等沿海地区橡胶生产经常遭受台风的严重危害[1]。据统计，1951～1990年间，热带风暴和台风在海南登陆共62次，平均每年1.55次[2]。解决橡胶树的抗风问题是这些地区橡胶树栽培与持续高产、稳产的重要措施之一。研究表明，橡胶树风害是各种生物和非生物因子的综合作用结果。与弱抗风品种相比较，抗风品种木材纤维较粗短、壁较薄、腔径较大[3-4]。因此，橡胶树木质部石蜡切片制作在橡胶树抗风因子研究中非常重要。 　　石蜡切片（paraffin section）技术被广泛应用于细胞生物学、组织学、发育生物学和病理学等领域[5]，常应用于动、植物标本的组织形态学观察、细胞结构学观察、特定组织蛋白免疫组化、原位杂交及原位PCR 等，使细胞组织的形态观察研究从简单的形态结构深入到各种成分的定性观察，又从定性转向定量计测[6]。常规石蜡切片的制作过程包括石蜡组织块制作、切片制作和染色，具体的制作过程是：取材→固定→冲洗→脱水→透明→浸蜡→包埋→切片→贴片→烤片→染色→封固。其中的每一个环节都是相互关联，任何一个环节若不按规范操作，都会影响最终制片的质量[7]。然而，在众多组织中，以高大乔木的木质部为材料制作石蜡切片尤为困难。笔者在总结前人研究的基础上，通过长期的摸索，改进了常规石蜡切片制作方法，使得30龄的橡胶树木质部组织也能被制作出高质量的切片。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 植物材料 　　供试植物材料为3龄和30龄的橡胶树品种PR107