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三角槭秋叶色素的测定及时序变化分析 　　摘要：以三角槭叶片为试验材料，比较了不同浸提液和浸提时间对色素浸提效果的影响，并对测定期内温湿度的变化与叶绿素、类胡萝卜素、花青素含量变化的相关性进行了分析。结果发现，适合叶绿素的浸提液为丙酮 ∶ 乙醇=1 ∶ 1，浸提时间为50 h；适合花青素的浸提液为0.1 mol/L的HCl，浸提时间为50 h。测定期内随着温度的降低，叶绿素、类胡萝卜素都呈下降趋势，而花青素的含量呈上升趋势。叶绿素、类胡萝卜素、花青素与测定期内平均温度的相关性达显著水平，而与湿度的相关性不强。 　　关键词：三角槭；叶绿素；类胡萝卜素；花青素；时序变化；温度 　　中图分类号： S792.350.1 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2017）20-0228-03 　　三角槭（Acer buergerianum Miq.）又名三角枫，为槭树科（Aceraceae）槭属落叶乔木，因其叶片秋季变为暗红色或橙红色，成为一种良好的彩叶观赏树种。其主要分布区位于长江流域，华北、华南、西南各省也有栽培[1]。对于彩叶树种变色机制的研究，国外起步较早，早在20世纪90年代，已有学者对红叶鸡爪槭和红花槭在不同环境条件下叶色的变化进行了研究[2-3]。近年来，国内关于槭树属植物的变色生理在红枫、紫花槭、白牛槭、拧筋槭、茶条槭、五角槭、自由人槭、红花槭等种或品种中已经有相关报道[4-7]，而对于三角枫变色机制的研究仅荣立苹等[1]进行了探索。 　　本研究以栽培于江苏农林职业技术学院内的三角槭优良单株为试验材料，研究其转色期叶片中叶绿素、花青素含量的变化，分析测定期内温湿度的变化与色素含量的关系，为进一步研究三角槭叶色变化的生理机制奠定基础。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　试验材料为三角槭优良单株，现栽培于江苏农林职业技术学院，该单株生长健壮，于秋季叶色转为亮红色，落叶初期为12月。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 取样 本试验于秋季三角槭进入转色期开始测定，试验期为2015年10月28日至12月2日。每周采样1次，采样时取树冠向阳面中部当年生枝条的叶片[4，8-9]，同时利用温湿度测定仪观测采样期前1周内的温湿度变化。 　　1.2.2 色素的提取 　　1.2.2.1 叶绿素的提取 将采集的叶片用清水冲洗干净，擦干，避开主脉，剪碎，并混合均匀[8]。称取剪碎的叶片0.2 g，放入50 mL的三角瓶中，加入浸提液20 mL。浸提液分别为80%丙酮、丙酮 ∶ 无水乙醇=1 ∶ 1、95%乙醇。倒入浸提液后立即用保鲜膜封口，并用黑色塑料膜将整个瓶子包裹起来，防止漏光。将培养瓶放置于32 ℃的环境下避光恒温进行浸提，浸提时间分别设定40、45、50 h，浸提过程中摇动几次。试验采用双因素完全随机组合设计，每个试验处理重复3次。 　　1.2.2.2 花青素的提取 称取剪碎的叶片1 g，放入50 mL三角瓶，加入0.1 mol/L的HCl 10 mL，封口，遮光（方法同叶绿素的提取），采用单因素试验设计，试验因子为浸提时间（40、45、50 h），每个处理重复3次。 　　1.2.3 光密度的测定 用分光光度计在470、645、646、649、663、665 nm的波长下测定叶绿素的D值，在530 nm下测定花青素的D值[10]。 　　1.2.4 色素的计算 色素计算公式分别用3种不同浸提液的色素浓度（mg/L）的计算公式进行计算，并对计算结果进行比较。80%丙酮作为浸提液的的计算公式为： 　　Ca=12.72×D663 nm-2.59×D645 nm；（1） 　　Cb=22.88×D645 nm-4.67×D663 nm；（2） 　　Ccar=（1 000×D470 nm-3.27×Ca-104×Cb）/229。（3） 　　丙酮 ∶ 乙醇=1 ∶ 1为浸提液的计算公式为： 　　Ca=12.21×D663 nm-2.81×D646 nm；（4） 　　Cb=20.13×D646 nm-5.03×D663 nm；（5） 　　Ccar=（1 000×D470 nm-3.27×Ca-104×Cb）/229。（6） 　　95%乙醇作为浸提液时的计算公式为： 　　Ca=13.95×D665 nm-6.88×D649 nm；（7） 　　Cb=24.96×D649 nm-7.32×D665 nm；（8） 　　Ccar=（1 000×D470 nm-2.05×Ca-114×Cb）/245[11]。（9） 　　?⑸鲜雠ǘ燃扑憬峁?转换为色素含量，利用公式： 　　色素含量（mg/g）=色素浓度（mg/L）×浸提液体积（mL）/[1 000×叶片质量（g）]；（10） 　　计算色素