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不同浓度七氟醚对人鼻咽癌细胞株CNE2黏附能力以及CD133表达的影响 　　[摘要] 目的 观察不同浓度七氟醚对人鼻咽癌细胞株CNE2黏附能力、CD133表达的影响。 方法 分为四组：对照组（Control组）、1.7%七氟醚组（Treat1组）、3.4%七氟醚组（Treat2组）和5.1%七氟醚组（Treat3组）。Treat1组、Treat2组和Treat3组人鼻咽癌CNE2细胞，经1.7%、3.4%、5.1%七氟醚作用2 h、4 h、6 h。检测细胞黏附率；采用qRT-PCR法检测CD133的mRNA表达。 结果 与处理前比较，Treat1组、Treat2组和Treat3组处理2 h、4 h和6 h时细胞黏附率降低，CD133的mRNA及其蛋白表达下调（P0.05）。 结论 七氟醚可降低人鼻咽癌细胞株CNE2的黏附能力，且呈浓度和时间依赖性，其机制可能与下调CD133的表达有关。 　　[关键词] 麻醉药，吸入；细胞黏附；CD133 　　[中图分类号] R614 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2013）27-0001-02 　　七氟醚于1968年由Regan合成，1986年完成1期临床试验，1990年首先由日本的药监部门批准临床使用。近年来，被许多著名麻醉学专家誉为吸入麻醉的里程碑式药物。研究表明，七氟醚可抑制结肠癌细胞和喉癌细胞的生长以及肺癌细胞的黏附[1，2]，但七氟醚对人鼻咽癌细胞株黏附能力的影响尚不明确。CD133能在多种肿瘤细胞系中被检测到，并被证实表达CD133表型的肿瘤细胞是人类脑肿瘤、胃癌、肝细胞癌、结直肠癌、前列腺癌、黑色素瘤、胰腺癌等实体肿瘤中的干细胞，参与肿瘤的侵袭转移[3-5]。本研究拟评价七氟醚对人鼻咽癌细胞株CNE2黏附能力、CD133表达的影响，现报道如下。 　　1 材料与方法 　　1.1 主要试剂与仪器 　　人鼻咽癌细胞株CNE2（南华大学研究所），RPMI 1640培养基、10%胎牛血清（Hyclone公司，美国），麻醉气体监测仪（Datex AS/3公司，芬兰），AestivaR/5型麻醉机（Datex Ohmeda公司，芬兰）。 　　1.2 细胞培养 　　CNE2细胞用含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基于37℃、5%CO2、饱和湿度培养箱中培养。 　　1.3 实验分组 　　取对数生长期的人鼻咽癌CNE2细胞，采用随机数字表法将其随机分为四组：对照组（Control组）、1.7%七氟醚组（Treat1组）、3.4%七氟醚组（Treat2组）和5.1%七氟醚组（Treat3组）。 　　1.4 细胞黏附实验 　　分别处理好细胞将100 μL细胞悬液加入96孔板中，继续培养1 h。每孔加入200 μL PBS，振摇5 min，洗2遍。弃PBS后加入MTT，于波长490 nm处，用酶标仪测定吸光度值，并计算黏附率=[（各实验孔黏附细胞吸光度值/对照孔黏附细胞吸光度值-1）×100%]。 　　1.5 CD133 mRNA表达的测定 　　采用qRT-PCR法测定CD133 mRNA的表达，qRT-PCR反应：反应体系为20 μL，包括稀释后的RT产物2 μL、2×qRT-PCR缓冲液10 μL、5 μmol/L miR-155特异性PCR引物0.4 μL、5 U/μL耐热DNA聚合酶0.2 μL、灭菌双蒸水7.4 μL。反应条件：先95℃ 3 min活化Taq酶，然后95℃ 12 s、62℃ 35 s，共40个循环。 　　1.6 统计学处理 　　采用SPSS 16.0统计学软件进行分析，组间比较采用单因素方差分析，组内比较采用重复测量设计的方差分析，P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 四组人鼻咽癌细胞株CNE2细胞黏附率的比较 　　见表1，与处理前比较，Treat1组、Treat2组和Treat3组处理2 h、4 h和6 h细胞黏附率降低（P0.05）；与处理2 h比较，Treat2组和Treat3组处理4和6 h细胞黏附率降低（P0.05）；与处理4 h比较，Treat2组和Treat3组处理6 h细胞黏附率降低（P0.05）；与Control组比较，Treat1组、Treat2组和Treat3组处理2 h、4 h和6 h细胞黏附率降低（P0.05）；与Treat1组比，Treat2组和Treat3组处理2、4和6 h细胞黏附率降低（P0.05）；与Treat2组比，Treat3组处理2 h、4 h和6 h细胞黏附率降低（P0.05）。 　　2.2 四组人鼻咽癌细胞株CNE2细胞CD133 mRNA表达改变 　　见表2，与处理前比较，Treat1组、Treat2组和Treat3组处理2 h、4 h和